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非肌层浸润性膀胱癌患者术前血清miR-29表达及其临床意义

2025-03-18 6 上传者：管理员

摘要：目的探讨非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)患者术前血清m iR-29表达及其临床意义。方法纳入160例行经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)治疗的NMIBC患者，设为观察组；纳入同期体检的150例健康体检者，设为对照组。采集所有研究对象5 ml空腹静脉血，采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-29水平，比较两组血清miR-29水平表达差异。观察组术后随访2年，分析术后复发的影响因素，并绘制受试者工作特征(ROC)曲线，探讨术前血清miR-29对NMIBC术后复发的预测价值。结果观察组血清miR-29表达量低于对照组(P<0.05)。TNM分期Ⅲ期、低分化患者术前血清miR-29水平低于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、中高分化患者(P<0.05)。共158例患者完成随访。158例NMIBC患者TURBT术后复发32例，复发率为20.25%。复发组术前血清miR-29表达量低于未复发组(P<0.05)。复发组TNM分期Ⅲ期、低分化占比高于未复发组(P<0.05)。经Logistic回归分析检验显示，术前血清miR-29过表达是术后复发的保护因素(OR<1,P<0.05)。绘制ROC曲线，术前血清miR-29预测NMIBC患者TURBT术后复发AUC值为0.801,预测价值中等。结论 NMIBC患者术前miR-29水平呈低表达，与肿瘤临床分期、分化程度联系紧密；可能与TURBT术后复发有关，开展NMIBC患者术前miR-29检查有助于预测TURBT术后复发。

关键词：
NMIBC
微小RNA-29
术后复发
泌尿系统恶性肿瘤
非肌层浸润性膀胱癌
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膀胱癌是男性常见泌尿系统恶性肿瘤,其中非肌层浸润性膀胱癌(non-MIBC,NMIBC)是常见的病理类型,约占初发膀胱癌的75%[1]｡近些年临床研究发现一些微小RNA(microRNA,miRNA)与癌症病情进展及预后联系密切[2]｡miR-29是目前研究较多的miRNA之一,其家族成员主要包括miR-29a､miR-29b､miR29c,田延龙等[3]研究证实,miR-29是肿瘤转移过程中上皮-间充质转化重要调节分子｡但目前miR-29在NMIBC的表达及意义并不明确,本研究对此探讨,旨在为临床诊疗NMIBC提供新思路｡

1、材料与方法

1.1一般资料

本研究的实施经医院医学伦理委员会审核批准｡纳入2019年1月至2021年10月医院160例拟行TURBT治疗的NMIBC患者,设为观察组;纳入同期体检的150例健康体检者,设为对照组｡纳入标准:①NMIBC符合《外科学(第9版)》[4]中的诊断标准,经体格检查､影像学检查及膀胱镜活检明确诊断;②观察组首发疾病,符合TURBT治疗适应症;③研究对象神志清晰,依从性良好,可配合本次试验;④遵照自愿原则,且签署研究知情同意书｡排除标准:①既往有神经疾病史;②伴凝血功能障碍或合并血液系统疾病;③观察组患者伴有其他恶性肿瘤;④骨髓造血功能异常｡剔除标准:不愿意继续配合试验或因各种原因无法完成随访工作者｡对照组男性88例,女性62例;年龄53~65岁,平均(59.28±1.67)岁｡观察组中男性96例,女性64例;年龄55~64岁,平均(59.52±1.58)岁｡两组一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),有可比性｡

1.2方法

血清miR-29水平检测:研究对象于入院当天采集空腹外周肘静脉血5ml,以3500r/min转速离心10min,离心半径10.0cm,取上清液并保存于-80℃冰箱待检｡采用实时荧光定量PCR法检测血清miR29水平:使用总RNA分离试剂盒提取总RNA,使用cDNA逆转录试剂盒将总RNA逆转录为cDNA,反应条件:30℃10min,95℃5min｡使用PrimerPremier5.0设计PCR引物,使用PCR基因扩增仪对引物进行扩增,质检后上机测序｡测序后原始数据经SolexaCHASTITY质控筛选,获得miR-29数据,以U6基因序列作为标准,用2-△△ct法检测miR-29相对表达量｡

基线资料收集:设计患者基线资料调查表,调查并记录研究所需基线资料,内容主要包括:年龄､性别(男､女)､术前体重指数(bodymassindex,BMI)､病理分期[5](Ⅰ~Ⅱ期､Ⅲ期,Ⅰ期)､肿瘤直径､肿瘤数量(单发､多发)､癌细胞分化程度(低分化､中高分化)､吸烟史(有､无)､淋巴结转移(有､无)｡

NMIBC术后复发判定:观察组患者均接受TURBT手术治疗,并由同一组医师团队实施手术,患者于术后每3个月完成1次门诊复查,随访24个月｡当随访期间,患者再次出现无痛性血尿､膀胱刺激征､继发感染,经膀胱造影和膀胱镜活检检查出存在肿瘤区域性复发则确诊为患者NMIBC术后复发[6]｡

1.3统计学处理

应用SPSS25.0统计软件分析研究数据｡符合正态分布的计量资料以(x珋±s)描述,独立样本t检验分析组间资料差异;计数资料以n(%)描述,采用χ2检验｡采用Logistic回归分析检验NMIBC患者TURBT术后复发的相关因素;绘制ROC曲线,得到曲线下面积(AUC),分析血清miR-29对NMIBC患者TURBT术后复发的预测价值,AUC<0.5表示无价值,0.5~0.7表示预测价值较低,0.7~0.9表示具有一定的预测价值,AUC>0.9表示预测价值高｡以P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结果

2.1观察组与对照组血清miR-29水平比较

观察组血清miR-29表达量为(5.08±0.24),对照组血清miR-29表达量为(7.52±0.31),观察组血清miR-29表达量低于对照组,差异有统计学意义(t=77.762,P<0.001)｡

2.2不同临床病理特征NMIBC患者血清miR-29水平比较

TNM分期Ⅲ期､癌细胞低分化患者术前血清miR29水平低于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期､癌细胞中高分化患者,差异有统计学意义(P<0.05)｡见表1｡

表1不同临床病理特征NMIBC患者血清miR-29水平比较(x珋±s)

2.3NMIBC患者术后复发情况

随访24个月期间,160例NMIBC患者有2例因自身原因退出试验,共158例患者完成本试验｡158例NMIBC患者TURBT术后复发32例,复发率为20.25%(32/158)｡

2.4复发与未复发患者术前血清miR-29水平比较

复发组TNM分期Ⅲ期､癌细胞低分化占比高于未复发组,术前血清miR-29表达量低于未复发组,差异有统计学意义(P<0.05)｡见表2｡

表2两组患者基线资料比较(例,%)

2.5NMIBC患者TURBT术前血清miR-29与术后复发关系回归分析

以NMIBC患者TURBT术后复发作为因变量(1=复发,0=未复发),将术前血清miR-29作为自变量(连续变量､实际值),经Logistic回归分析检验,结果显示,NMIBC患者TURBT术前血清miR-29表达与术后复发有关,可能是术后复发的保护因素(OR=0.007,95%CI:0.001~0.550,P<0.001)｡

2.6NMIBC患者TURBT术前血清miR-29对术后复发的预测价值

以NMIBC患者TURBT术后复发作为状态变量(1=复发,0=未复发),纳入术前血清miR-29作为检验变量,绘制ROC曲线,见图1,结果显示术前血清miR-29预测NMIBC患者TURBT术后复发AUC值为0.801(95%CI:0.714~0.889),预测价值中等,对应的最佳阈值､灵敏度､特异度､约登指数分别为4.895､0.849､0.656､0.505｡

图1NMIBC患者术前血清miR-29预测术后复发的ROC曲线图

3、讨论

miRNA是一类非编码单链RNA分子,可互补结合靶基因3'端非翻译区,靶向调控大量编码基因翻译,影响多种癌症的发生发展[7-8]｡邱厚兵等[9]研究发现,膀胱癌患者血清miR-29表达低于健康对照者,这与本研究结果吻合,同时该研究指出miR-29低表达与膀胱癌TNM分级呈正相关,且是膀胱癌发病的危险因素｡对此,本研究结果显示,TNM分期Ⅲ期､癌细胞低分化患者术前血清miR-29水平低于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期､癌细胞中高分化患者,提示miR-29参与膀胱癌的病情进展及癌细胞分化｡

TURBT适应症为表浅膀胱肿瘤､未浸及粘膜下层者,患者预后较好,但术后仍有复发风险｡本研究结果显示,随访2年间,158例NMIBC患者TURBT术后复发32例,复发率为20.25%,这与杨庆良等[10]研究结果基本相同,证实NMIBC患者TURBT后确实存在一定肿瘤复发风险｡考虑到miR-29可能参与膀胱癌的病情进展及癌细胞分化过程,或可将之用于NMIBC患者TURBT后肿瘤复发预测,以期评估患者术后复发风险,指导临床实施针对性的治疗｡

本研究经Logistic回归分析,结果证实,NMIBC患者术前血清miR-29与肿瘤复发有关,是复发的保护因素,判断术前miR-29在NMIBC发展中发挥抑癌基因作用｡余淦等[11]在体外实验研究发现,miR-29c中的mir-29c-3p可同时下调牛磺酸上调基因1(该上调基因能通过抑制多种miRNA和调节相关信号通路,促进膀胱癌细胞的增殖､侵袭和转移,抑制膀胱癌细胞的凋亡)及钙蛋白酶7(在癌组织及癌细胞中呈过表达,促进癌细胞迁移､增殖)表达,发挥抑制NMIBC细胞增殖､侵袭及迁移｡Lee等[12]研究发现,过表达miR-29c3p能够挽救因B7-H3(又称为CD276,属B7免疫共刺激和共抑制家族,在人恶性肿瘤中呈高表达)降低的自然杀伤细胞的细胞毒性,控制癌症患者肿瘤细胞的增殖及凋亡｡目前,临床研究关于miR-29对膀胱癌细胞增殖､侵袭及迁移能力抑制作用的具体机制尚未完全明确,鉴于miR-29家族主要包括miR-29a､miR29b､miR-29c,三者序列高度相似,部分sgRNA靶向序列末端碱基序列完全一致,推定其功能也类似[13]｡由此认为,miR-29在NMIBC患者体内整体发挥抑癌作用,当其低表达时提示患者癌细胞运动和浸润能力仍较强,或自然杀伤细胞的细胞毒性难以有效抑制癌细胞术后的繁殖､迁移及侵袭,因而术前miR-29低表达提示术后有较高的复发风险｡

为进一步明确NMIBC患者TURBT术前血清miR-29表达对术后复发的预测价值,本研究绘制了ROC曲线,结果显示,术前血清miR-29预测复发的AUC值为0.801,预测价值处于中等水平｡对此建议NMIBC患者TURBT前检测血清miR-29水平,可用以评估肿瘤复发风险,同时可将miR-29作为治疗靶点并联合实施靶向治疗,或有助于降低患者术后肿瘤复发风险,改善患者生命质量｡

综上所述,NMIBC患者术前miR-29水平呈异常表达,与肿瘤临床分期､分化程度联系紧密;同时患者术前miR-29水平低表达与术后复发有关,术前检查miR-29可用于预测NMIBC患者术后复发风险,能为临床制定个体化的治疗方案提供指导｡

参考文献:

[2]赵强,王亮.miR-92在膀胱癌患者中的表达与膀胱癌细胞侵袭和耐药性的关系〔J〕.基因组学与应用生物学,2020,39(2):961-968.

[3]陈孝平,汪建平,赵继宗.外科学(第9版)〔M〕.北京:人民卫生出版社,2018:568-570.

[4]田延龙,何小岗,高晓,等.miR-29靶向调控CDK6对宫颈癌细胞生物学行为的影响〔J〕.临床误诊误治,2018,31(7):86-90.

[5]袁帅,毕兴,牛越,等.术前预后营养指数联合血清CXCL5､YKL-40对非肌层浸润性膀胱癌患者经尿道膀胱肿瘤电切术后复发的预测价值〔J〕.现代生物医学进展,2022,22(20):3912-3916,3940.

[7]邴钟兴,曹磊,曹智理,等.过表达miR-145-5p通过下调IGF1R抑制食管鳞状细胞TE-10细胞的恶性生物学行为〔J〕.中国肿瘤生物治疗杂志,2020,27(6):634-639.

[8]汤永喆,王浩,何奇,等.miR-223及Hsp70在人乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中的表达研究〔J〕.现代肿瘤医学,2020,28(8):1304-1307.

[9]邱厚兵,王春燕,彭胡,等.血清miR-145､miR-29联合miR-217检测在膀胱癌的表达差异及价值分析〔J〕.标记免疫分析与临床,2019,26(7):1163-1167,1170.

[10]杨庆良,陈志峰,王军,等.非肌层浸润性膀胱癌患者经尿道膀胱肿瘤电切术后复发的影响因素〔J〕.实用癌症杂志,2022,37(2):309-311.

[11]余淦,周辉,许凯,等.靶向TUG1的mir-29c-3p通过调节CAPN7的表达影响膀胱癌细胞的迁移和侵袭〔J〕.南方医科大学学报,2020,40(9):1325-1331.

[13]魏燕,魏金星,王丽琴,等.微小RNA-29在膀胱癌组织的表达及其意义〔J〕.中华实验外科杂志,2017,34(7):1227-1228.