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LncRNAHCG22在皮肤鳞癌组织和细胞中的表达及意义

2024-12-24 28 上传者：管理员

摘要：目的研究HCG22在皮肤鳞癌(SSCC)患者血清中的表达水平,探讨其对宫颈癌诊断及高危HPV感染预测的临床价值｡方法纳入2018年12月至2021年2月收治的125例SSCC患者,其中包括78例高危型HPV(HR-HPV)患者,同时选取76例健康人群作为对照｡RT-qPCR检测SSCC患者和对照受试者血清中HCG22的表达,ROC曲线分析HCG22对SSCC的诊断效能｡根据SSCC患者血清中HCG22表达水平的中位值将SSCC患者分为HCG22低表达组和高表达组,分析其与SSCC患者临床指标的相关性｡分析HCG22与SSCC患者的病理指标的相关性｡Logistics多因素回归分析HCG22是否与高危型HPV感染SSCC具有独立相关性｡结果和健康受试者相比,SSCC患者血清中HCG22表达显著降低,其诊断SSCC的ROC曲线下面积(areaunderthecurve,AUC)为0.9394,截点值为0.3850,灵敏度88.18%,特异度92.00%｡

关键词：
HCG22
ROC
物理损伤
皮肤鳞癌
高危型HPV
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表皮最外层的角质层可以防止物理损伤､化学刺激和微生物入侵,然而,化学物质､紫外线辐射､烟雾和污染物等多种危险因素会导致皮肤损伤甚至皮肤河北医药皮肤鳞状细胞癌(CSCC)来源于角质形成细胞,是非黑色素瘤皮肤癌的第二大常见原因[3]｡CSCC是皮肤上皮的恶性增生,占所有皮肤癌的20%~50%[4]｡长链非编码RNA(lncRNA)是各种生物过程的重要调节因子,包括癌症干性和肿瘤发生[5],它们在CSCC细胞行为中的作用也已被广泛研究[6-8]｡LncRNAHCG22(HLAcomplexgroup22)是常见lncRNAs的一种,已被报道在食管鳞癌､口腔鳞癌等组织中特异性表达下调且发挥一定抑癌作用,被认为是潜在的治疗新靶点[9-10]｡宫颈癌是世界范围内最常见的妇科恶性肿瘤之一,已成为突出的公共卫生问题[11]｡据报道,宫颈癌发病率居妇科恶性肿瘤第二位,死亡率居女性生殖道恶性肿瘤之首[12]｡宫颈癌的发展过程是从正常宫颈上皮通过鳞状上皮内病变(SIL)发展为由人乳头瘤病毒(HPV)持续感染引起的浸润性癌｡根据致癌能力,HPV可分为低风险和高风险HPV(HR⁃HPV)类型,其中HR⁃HPV16/18占侵袭性宫颈癌感染的70%,是最常见的致癌HPV类型[13]｡大多数HPV感染是短暂的,个体免疫功能强的人大概会消除感染[14]｡但是,免疫特性受损会降低清除HPV感染的能力,并且宫颈内持续存在HR⁃HPV感染会增加宫颈癌发生危险[15-16]｡在过去的几十年中,侵袭性宫颈癌的发病率和死亡率在许多国家有所降低,这主要是由于在资源丰富的国家实施了筛查计划[17],HPV检测是预防宫颈癌的有效筛查策略[18]｡本研究探讨HCG22在SSCC患者血清中的表达水平及对宫颈癌诊断及高危HPV感染预测的临床价值,为诊断及治疗提供新思路｡

1､资料与方法

1.1一般资料

选取我院2018年12月至2021年2月收治的皮肤鳞癌患者125例(SSCC组),年龄26~57,平均年龄(38.04±6.61)岁｡125例皮肤鳞癌患者的临床分期:Ⅰ期50例,Ⅱa期41例,Ⅱb期34例;有淋巴结转移24例,无淋巴结转移101例;浸润深度≤1/2肌层86例,<1/2肌层39例;高危型HPV(HR⁃HPV)感染阴性患者47例,阳性患者78例｡另取同期体检患者76例作为对照组,2组一般资料具有均衡性｡本研究获得医院伦理委员会批准,并与患者或家属签署知情同意书｡

1.2纳入与排除标准

1.2.1纳入标准

:①经病理确诊为皮肤鳞癌者;②术前均未接受放射治疗､化疗或生物免疫治疗者;③能配合本次研究及病历资料完整者｡

1.2.2排除标准:

①下生殖道非HPV相关癌症,如与HPV无关的黑色素瘤;②术前已行放疗､化疗或生物免疫治疗者;③术前有急慢性感染性疾病､血液系统疾病､自身免疫性疾病及合并其他恶性肿瘤者｡

1.3方法

1.3.1HR⁃HPV检测:

RocheCobasHPV实时PCR检测(Switzerland,Roche,Cobas4800)按照制造商的检测HR⁃HPV感染的方案用作本研究的主要检测方法｡该检测可检测14种HR⁃HPV亚型:16､18､31､33､35､39､45､51､52､56､58､59､66和68｡当机器判断为其中任何一种HPV为阳性时,判断该疾病为HR⁃HPV阳性｡

1.3.2RT⁃qPCR:

所有受试者在入组时采集空腹静脉血,2h内分离血清,并储存在-80℃冰箱中保存｡使用TRIzol试剂(Invitrogen,美国)从血清中提取总RNA,然后使用反转录试剂盒(Invitrogen,美国)反转录合成RNA的第一链cDNA｡使用SYBRGreenPCR试剂盒(日本TaKaRa)进行实时PCR｡GAPDH作为内参｡采用2-ΔΔCT法,以GAPDH的表达为标准,计算基因的相对表达量｡见表1｡

表1引物序列

1.4统计学分析应用

SPSS21.0和GraphPadPrism8统计软件,计数资料以构成比表示,2组比较采用Fisher检验,多组采用χ2检验;计量资料以x±s表示,采用独立样本t检验;受试者工作特征曲线(ROC)分析诊断价值,二元Logistic回归方程评估HR⁃HPV感染阳性CC患者的影响因素,采用Enter法筛选自变量｡P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结果

2.1LncRNAHCG22

在皮肤鳞癌患者血清中低表达且有较高的诊断效能本研究共纳入125例SSCC患者和76例健康对照受试者,RT⁃qPCR检测血清中HCG22的表达｡与对照组比较,SSCC患者血清中HCG22表达水平显著降低(P<0.001)｡为进一步探讨血清HCG22表达水平对SSCC的诊断价值,绘制以HCG22表达量区分SSCC患者和正常健康人群的ROC曲线(P<0.0001),曲线下面积(areaunderthecurve,AUC)为0.9394,截点值为0.3850(灵敏度88.18%,特异度92.00%)｡表明血清HCG22水平对SSCC具有一定的辅助诊断价值｡见图1､2｡

图1RT⁃qPCR检测血清中HCG22的表达

图2ROC曲线分析HCG22对SSCC患者的诊断效能

2.2血清HCG22表达水平与皮肤鳞癌患者临床病理特征的相关性

以SSCC患者血清HCG22水平的中位值将SSCC患者分为HCG22高表达组和低表达组,进一步分析血清HCG22水平与SSCC患者临床病理特征的相关性｡结果显示:HCG22表达水平的高低与临床分期､肿瘤分化程度､淋巴结转移､浸润肌层深度显著相关(P<0.05),而与年龄､肿瘤大小､病理类型无显著相关(P>0.05)｡见表2｡

2.3HCG22低表达可辅助鉴别皮肤鳞癌HR⁃HPV感染

根据HPV检测结果,将SSCC患者分为HR⁃HPV阴性组(n=47)和HR⁃HPV阳性组(n=78)｡RT⁃qPCR结果显示,在HR⁃HPV感染阳性SSCC患者血清中,HCG22表达水平显著低于HR⁃HPV阴性SSCC患者(P<0.001)｡进一步绘制以HCG22表达量区分HR⁃HPV阳性SSCC患者和HR⁃HPV阴性感染SSCC

表2皮肤鳞癌患者血清HCG22表达水平与临床病理特征的关系

例项目HCG22低表达组高表达组χ2值P值年龄(岁)0.07239-<35(n=62)3230≥35(n=63)3132肿瘤大小(cm)0.3972-≤4(n=65)3134>4(n=60)3228临床分期19.78<0.0001Ⅰ期(n=50)3515Ⅱa期(n=41)2120Ⅱb期(n=34)727分化程度9.6320.0028高分化(n=36)2610中低分化(n=89)3752淋巴结转移13.520.0002有(n=24)420无(n=101)5942浸润深度27.80<0.0001≤1/2肌层(n=86)5729>1/2肌层(n=39)633

患者的ROC曲线(P<0.0001),曲线下面积(areaunderthecurve,AUC)为0.7381,截点值为0.3150(灵敏度83.33%,特异度68.09%)｡见图3､4｡

图3RT⁃qPCR检测血清中HCG22的表达

2.4HCG22与皮肤鳞癌高危型HPV感染具有独立相关性

2.4.1比较分析

HCG22高表达组和低表达组SSCC患者中HR⁃HPV感染的发生率｡结果显示,在HCG22低表达的SSCC患者中,HR⁃HPV感染阳性患者52例(82.54%),显著高于HCG22低表达者(P<0.01)｡表明HCG22低表达SSCC患者有更高的HR⁃HPV感染发生率｡见表3｡

2.4.2进一步探究

HCG22是否与HR⁃HPV感染阳性SSCC患者具有独立相关,我们首先通过Logistic单因素回归分析对SSCC患者各临床指标与HR⁃HPV是否感染的相关性进行分析,然后根据单因素回归分析

图4ROC曲线分析

HCG22对HR⁃HPV阳性SSCC患者的诊断效能表3HR⁃HPV阳/阴性SSCC患者HCG22表达例HR⁃HPV感染HCG22高表达(n=62)HCG22低表达(n=63)阴性(n=47)3710阳性(n=78)2652χ2值24.17P值<0.001结果,将P<0.01的临床分期､肿瘤分化程度､淋巴结转移､浸润深度､HCG22作为自变量纳入多因素Logistic回归分析,结果显示,在调整了临床分期､肿瘤分化程度､浸润深度后,血清HCG22与皮肤鳞癌患者HR⁃HPV⁃感染具有独立相关性(P=0.019,OR=2.587,95%CI=1.168~5.733)｡以上结果表明,HCG22低表达SSCC患者相较于HCG22高表达SSCC患者而言,由HR⁃HPV感染的风险更高｡见表4｡

表4HCG22与皮肤鳞癌高危型HPV感染具有独立相关性项目

3、讨论

近年来,SSCC的发病率呈上升趋势[19]｡预后通常是有利的,大多数患者通过局部治疗治愈,除了一小部分(<10%)远处转移或复发不适合手术或放疗｡初始病变最常见于(80%)头颈部(H&N):转移可能发生在淋巴结､肺､肝脏或骨骼[20]｡化疗(CT)适用于以姑息治疗为目的的复发性或转移性(R/M)疾病,最常用的药物方案是以顺铂为基础[21],可是其临床缓解效果有限｡因此,确定R/MSSCC的有效治疗方法及靶点是迫切的需求｡本研究发现LncRNAHCG22在皮肤鳞癌中低表达,且具有较好的诊断效能,这或许能为该病在临床上的靶向治疗提供新的思路｡人乳头瘤病毒作为一种具有种属特异性的DNA病毒,具有高度组织和宿主特异性,可以引起黏膜增生到恶性肿瘤的多种病变｡机体感染人乳头瘤病毒后,免疫系统会发生改变,产生大量的炎性因子或细胞因子,造成机体出现炎性反应及组织损伤进行多中心前瞻性研究[22]｡HPV根据致病能力分为高危型和低危型｡临床病理研究证实,除了在宫颈癌中被广泛(>90%)检出,HPV也可以在头颈部鳞状细胞癌以及消化道癌､膀胱癌､肺鳞状细胞癌和阴茎癌等人类多种上皮组织恶性肿瘤中被检出[23-24],提示与HPV鳞癌发生有密切关系｡本研究观察到HCG22低表达组的皮肤鳞癌患者HPV高危型发生较多,这提示HCG22在临床也具有一定成为HPV高危型皮肤鳞癌的诊断标志物｡在未来的研究中,我们将进一步探究HCG22在皮肤鳞癌中对HPV亚型致病的影响,例如HPV16是HPV家族中最为常见的一种高危致病型,HPV16E7已被确认为是一种重要的原癌蛋白,能够绕过细胞周期检测位点,破坏细胞周期的负调控最终诱导恶性肿瘤的发生[25]｡以期进一步为皮肤鳞癌的诊断及治疗靶点提供新的思路｡

参考文献:

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[6]卞坤鹏,徐保来,李伟栋,等.LncRNARP11-789C1.1通过Wnt/β-catenin信号通路靶向miR-558调控皮肤鳞癌细胞的增殖､迁移､侵袭和凋亡.中国老年学杂志,2022,42(7):1731-1735.

[7]许文,刘绪宏,刘华.下调HOXA-AS2/miR-20a通路促进皮肤鳞癌细胞凋亡并抑制其侵袭迁移.第三军医大学学报,2020,42(20):2003-2011.

[8]郑云鹏,蔡丙杰,李旭阳,等.lncRNADLX6-AS1通过靶向miR-16-5p/NUCKS1调控皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖､迁移和侵袭.中华皮肤科杂志,2020,53(8):607-615.

基金资助:辽宁省科学技术计划项目(编号:2019020130-418);

文章来源:才曼,刘迎春,李冰.LncRNAHCG22在皮肤鳞癌组织和细胞中的表达及意义[J].河北医药,2024,46(23):3529-3533.