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sema3c在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

2021-06-01 136 上传者：管理员

摘要：目的:探讨sema3c在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学法对122例胰腺癌组织及癌旁组织进行sema3c表达的检测，分析sema3c表达与胰腺癌患者临床病理特征和预后的关系。结果:在122例胰腺癌组织中，共有86例表现出阳性表达，阳性率为70.5%(86/122);在癌旁组织中共有18例表现出阳性表达，阳性率为14.8%(18/122);两者比较有显著性差异(P=0.000)。sema3c表达与胰腺癌患者TNM分期和有无淋巴结转移有关(均P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关(均P>0.05)。随访122例胰腺癌患者，sema3c阴性表达患者中位生存期为27(9,45)个月，sema3c阳性表达患者中位生存期为10(7,31)个月。sema3c阳性表达患者5年生存率明显低于sema3c阴性表达患者(P=0.011)。将122例胰腺癌患者临床病理指标纳入单因素COX回归分析，结果显示，肿瘤TNM分期、分化程度、有无淋巴结转移及sema3c表达与预后相关(均P<0.05)。将上述影响预后的因素纳入多因素回归分析，结果显示，肿瘤TNM分期、分化程度、有无淋巴结转移及sema3c表达可作为胰腺癌患者总生存率的独立预后预测因子(均P<0.05)。结论:sema3c可能作为胰腺癌治疗的靶点之一，对于预后判断可能具有明显价值。

关键词：
sema3c
免疫组化
胰腺恶性肿瘤
胰腺癌
预后判断
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胰腺癌主要指胰外分泌腺腺癌，是胰腺恶性肿瘤中最常见的一种，占消化道恶性肿瘤的8%～10%,约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌[1]。胰腺癌早期症状隐匿，当出现典型症状时多已属晚期，治疗效果不理想，5年生存率仅为4%,是恶性程度高、进展迅速、严重危害人类健康的肿瘤之一[2,3]。近年来，人们对分子及细胞水平做了大量研究，期望弄清胰腺癌的发病机制，寻找早期诊断的靶点为胰腺癌的早期诊断及治疗提供帮助。神经轴突导向因子semaphorins是调节细胞分化、形态及功能以及细胞间相互作用的可溶性蛋白质家族，而sema3c是semaphorins家族成员之一，由约500个氨基酸残基组成的sema结构域。sema3c在胃癌、乳腺癌、肝癌等肿瘤中高表达，但其在胰腺癌中的作用尚不清楚，本研究通过免疫组织化学法检测sema3c在胰腺癌组织中的表达，并分析其与临床病理特征和预后的关系。

1、资料与方法

1.1一般资料

收集2014年6月至2018年6月我院外科行胰腺癌切除手术的122例胰腺癌患者标本和临床资料，患者标本包括石蜡包埋的肿瘤组织标本及其癌旁组织标本(距癌组织边缘1.5～2cm区域),临床资料包括患者性别、年龄、肿瘤大小、病理分期、分化程度、淋巴结转移情况等。纳入标准：均经病理学诊断为胰腺癌；术前均未接受放化疗。排除标准：有既往恶性肿瘤病史者；伴随其他恶性肿瘤者。本研究已获得本院伦理委员会批准，患者均对本研究知情并签署知情同意书。

1.2主要试剂

兔抗人sema3c单克隆抗体(英国Abcam公司),RIPA蛋白裂解液、BCA工作液和PMSF蛋白酶抑制剂(碧云天公司),免疫组化试剂盒、PBS缓冲液，抗原修复液和DAB显色试剂(福州迈新生物技术开发有限公司)。

1.3方法

收集这些病人的手术切除标本，均经常规石蜡包埋，以4μm厚度行连续切片，置于恒温烘烤箱中,60℃烤片1h。①二甲苯脱蜡，用无水乙醇、梯度浓度乙醇和蒸馏水中水化，清除二甲苯；②用3%过氧化氢处理切片10min,室温避光条件下孵育30min;③用PBS洗涤3次，5min/次，然后将切片放入抗原修复液中，pH值6.0枸橼酸缓冲液高压锅修复3min;④将切片从高压锅中取出，自然冷却至室温后，于浓度为1mol/L的TBS溶液中清除抗原修复液，PBS洗涤3次，5min/次；⑤用5%BSA室温封闭30min,甩掉封闭液，滴加sema3c抗体50μL(美国Abcam公司，稀释比例为1∶100)覆盖组织，4℃冰箱孵育过夜；⑥第2天于4℃冰箱中取出切片，PBS洗涤3次，5min/次，滴加山羊抗IgG二抗(1∶2000,美国Abcam公司)覆盖组织，室温孵育30min;⑦甩掉山羊抗IgG二抗后，用PBS洗涤3次，5min/次，室温下孵育30min;⑧每张切片滴200μLDAB溶液，室温下孵育5min,进行DAB显色；⑨放入苏木素溶液中复染约3min后用自来水冲洗；⑩梯度酒精脱水，用中性树脂和玻片封片，在显微镜下观察并拍照。

sema3c染色定位在细胞浆内，光镜下观察阳性细胞的数量。每张切片随机选取6个400倍光学显微镜下视野，最终结果取平均值。免疫组化评分通过染色强度值与染色阳性细胞百分比的乘积进行计算。着色强度为0级(无着色/-)计0分，1级(黄色/+)计1分，2级(棕黄色/++)计2分，3级(棕褐色/+++)计3分。阳性细胞百分比≤5%计0分，6%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，>75%计4分。总分由阳性细胞百分比及着色强度两项计分相乘所得，总分<4分为阴性，总分≥4分为阳性。

1.4随访

采用电话或门诊方式对患者进行随访，确定其肿瘤复发情况及生存时间，以患者死亡作为随访观察终点，随访截止日期为2019年6月。

1.5统计学方法

采用SPSS20.0软件对数据进行处理分析，计量资料以均数±标准差(x¯±s)表示，组间比较采用独立t检验；计数资料采用χ2检验；采用Kaplan-Meier及Log-Rank检验分析患者生存率；采用COX回归分析进行生存分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1sema3c在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达

在免疫组化染色结果上，sema3c表达阳性染色定位在肿瘤细胞胞膜和胞浆上，免疫组化阳性反应产物均呈棕黄色或棕褐色。在122例胰腺癌组织中，共有86例表现出阳性表达，阳性率为70.5%(86/122);在癌旁组织中共有18例表现出阳性表达，阳性率为14.8%(18/122)。两者比较，差异有统计学意义(χ2=77.490,P=0.000)。sema3c表达情况见图1。

2.2sema3c表达与胰腺癌患者临床病理特征的关系

sema3c表达与胰腺癌患者TNM分期和有无淋巴结转移有关(均P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关(均P>0.05),见表1。

2.3sema3c表达与胰腺癌患者预后的关系

随访122例患者，截止日期到2019年6月。共失访4例(3.3%),中位随访时间为23个月。sema3c阴性表达患者中位生存期为27(9,45)个月，sema3c阳性表达患者中位生存期为10(7,31)个月。sema3c阳性表达患者5年生存率明显低于sema3c阴性表达患者(χ2=6.401,P=0.011),见图2。

2.4影响胰腺癌患者预后的单因素和多因素分析

将122例胰腺癌患者临床病理指标纳入单因素COX回归分析，结果显示，肿瘤TNM分期、分化程度、有无淋巴结转移及sema3c表达与预后相关(均P<0.05),见表2。将上述影响预后的因素纳入多因素回归分析，结果显示，肿瘤TNM分期、分化程度、有无淋巴结转移及sema3c表达可作为胰腺癌患者总生存率的独立预后预测因子(均P<0.05),见表2。

图1sema3c在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达(SP×400)

表1sema3c表达与胰腺癌患者临床病理特征的关系

3、讨论

胰腺癌是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤。胰腺癌早期的确诊率不高，手术死亡率高，而治愈率很低[4]。目前诊断胰腺癌的方式主要是B超、CT、MRI、ERCP、PTCD、血管造影、腹腔镜检查和术中病理检测等，然而以上检查手段一般不应用于肿瘤的早期筛查且费用昂贵，因此寻找新的胰腺癌肿瘤标志物具有重要意义[5,6,7]。神经轴突导向因子semaphorins是调节细胞分化、形态及功能以及细胞间相互作用的可溶性蛋白质家族，其主要表现于细胞膜和胞浆上[8,9,10]。信号素semaphorins在许多疾病的病理生理调节中起着一定的作用，如肿瘤、免疫性疾病等。例如，sema3B和sema3F在子宫内膜癌和直肠癌中有较强的抗肿瘤作用[11,12];有研究表明，乳腺癌组织和血清中sema4A的表达增加，且沉默sema4A可以抑制癌细胞增殖[13]。侯丽艳等[14]研究表明，干扰sema4D的表达可以抑制胰腺癌细胞增殖，抑制胰腺癌细胞的侵袭能力。

图2sema3c表达与胰腺癌患者预后关系的生存曲线

表2影响胰腺癌患者预后的单因素和多因素分析

sema3c是semaphorins家族成员之一，由约500个氨基酸残基组成的sema结构域。研究发现，sema3c在肝癌、胃癌、乳腺癌中过表达，且发现与胃癌、乳腺癌的分期分级有一定的相关性，sema3c表达越高，分期分级越高。有研究发现sema3c与宫颈癌患者预后差有关，沉默sema3c可抑制宫颈癌细胞增殖、集落形成能力及p-ERK信号通路的激活[15]。ZHU等[16]发现，sema3c在乳腺癌中的发生发展中起重要作用，能促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移。LEE等[17]研究发现sema3c的过表达可促进前列腺癌细胞的侵袭。

本研究收集收集2014年6月至2018年6月我院外科行胰腺癌切除手术的122例胰腺癌患者肿瘤组织标本及其癌旁组织标本和临床资料。首先通过免疫组化实验检测sema3c蛋白的阳性表达情况，随后分析sema3c表达与胰腺癌患者临床病理特征的关系及sema3c表达与胰腺癌患者预后的关系，最后对影响胰腺癌患者预后进行单因素和多因素分析。研究结果显示，sema3c在胰腺癌组织中阳性表达显著高于癌旁组织。sema3c表达与胰腺癌患者TNM分期和有无淋巴结转移有关，而与患者性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关。随访122例患者，sema3c阴性表达患者中位生存期为27个月，sema3c阳性表达患者中位生存期为10个月；sema3c阳性表达患者5年生存率明显低于sema3c阴性表达患者。提示sema3c具有成为胰腺癌预后判断标记的潜力。将122例肺腺癌患者临床病理指标纳入单因素COX回归分析，结果显示，肿瘤TNM分期、分化程度、有无淋巴结转移及sema3c表达与预后相关；将上述影响预后的因素纳入多因素回归分析，结果显示，肿瘤TNM分期、分化程度、有无淋巴结转移及sema3c表达可作为胰腺癌患者总生存率的独立预后预测因子。提示胰腺癌的发生是一种逐步发展的过程，sema3c可能参与了胰腺癌的发展和转移过程。单因素及多因素回归分析结果进一步证实了sema3c蛋白可作为胰腺癌患者预后的独立危险因素。

综上所述，胰腺癌组织中sema3c高表达，且与恶性临床病理特征及不良预后有关，可能作为胰腺癌治疗的靶点之一，对于预后判断可能具有明显价值。

参考文献：

[1]刘梦奇,吉顺荣,徐晓武,等.2019年胰腺癌研究及诊疗新进展[J].中国癌症杂志,2020,30(01):1-10.

[4]蒋琪,周玮,邹多武,等.《2019年美国预防医学工作组专家共识:胰腺癌的筛查》摘译[J].临床肝胆病杂志,2020,36(01):47-49.

[5]王天佐,姜慧杰.胰腺导管腺癌CT､MR相关研究进展[J].现代肿瘤医学,2020,28(04):672-676.

[14]侯丽艳,贾如江,任利兵,等.干扰Sema4D基因表达对胰腺癌细胞生物学特征的影响[J].临床肝胆病杂志,2018,34(02):350-353.

文章来源：汤杰,胥明,李琴.sema3c在胰腺癌组织中的表达及其临床意义[J].现代肿瘤医学,2021,29(12):2095-2098.

基金：上海市浦东新区卫生系统学科带头人培养实施计划(编号:PWRd2015-10);上海市浦东新区卫健委三年行动计划高峰学科建设计划(编号:PWYgf2018-04)