首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 肿瘤科论文 > 脑胶质瘤论文 > T淋巴细胞亚群在胶质瘤患者外周血及癌组织中水平及意义

T淋巴细胞亚群在胶质瘤患者外周血及癌组织中水平及意义

2024-06-11 11 上传者：管理员

摘要：目的观察胶质瘤患者外周血及癌组织T淋巴细胞亚群水平变化，探讨其在胶质瘤中的作用。方法 2022年12月—2023年8月新疆医科大学第二附属医院诊治胶质瘤患者12例为胶质瘤组(根据WHO分级分为低级别组2例和高级别组10例),均行手术切除治疗，术前采集外周血标本，术中收集癌组织及癌旁正常组织标本。健康体检者11例为对照组，体检日采集外周血标本。采用流式细胞术检测外周血和癌组织、癌旁组织CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞百分比，计算CD4+/CD8+;采用免疫组织化学法检测癌组织Ki-67表达情况。比较胶质瘤组与对照组外周血，胶质瘤患者癌组织与癌旁正常组织、外周血与癌组织，低级别组与高级别组外周血、癌组织T淋巴细胞亚群水平。采用Pearson相关法分析胶质瘤患者癌组织T淋巴细胞亚群与Ki-67表达的相关性。结果胶质瘤组外周血CD4+ T淋巴细胞百分比[(41.41±9.16)%]低于对照组[(50.74±0.69)%](t=3.407,P=0.007),CD3+、CD8+ T淋巴细胞百分比及CD4+/CD8+与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。胶质瘤患者癌组织CD4+、CD8+ T淋巴细胞百分比[(58.04±13.76)%、(16.47±9.56)%]均低于癌旁正常组织[(77.43±24.82)%、(25.48±9.01)%](t=5.516,P=0.004;t=2.157,P=0.007),CD3+ T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+与癌旁正常组织比较差异均无统计学意义(P>0.05)。高级别组外周血CD4+T淋巴百分比[(43.95±11.53)%]低于低级别组[(49.60±43.95)%](t=2.422,P=0.009),CD8+T淋巴细胞百分比[(29.63±12.48)%]高于低级别组[(22.30±3.59)%](t=2.645,P=0.016),CD3+T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+与低级别组比较差异均无统计学意义(P>0.05);高级别组癌组织CD4+、CD8+ T淋巴细胞百分比[(53.80±11.45)%、(13.90±2.81)%]均低于低级别组[(72.90±3.54)%、(28.30±5.52)%](t=2.576,P=0.003;t=3.579,P=0.008),CD4+/CD8+(3.87±0.04)高于低级别组(2.64±0.64)(t=0.645,P=0.030),CD3+T淋巴细胞百分比与低级别组比较差异无统计学意义(P>0.05)。胶质瘤患者癌组织CD3+、CD8+ T淋巴细胞百分比均低于外周血(P<0.05),CD4+ T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+均高于外周血(P<0.05)。胶质瘤患者癌组织CD3+T淋巴细胞百分比与Ki-67表达呈负相关(r=-0.669,P=0.024),CD4+T淋巴细胞百分比与Ki-67表达呈正相关(r=0.681,P=0.009),CD8+ T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+与Ki-67表达均无相关性(r=-0.497,P=0.120;r=0.162,P=0.634)。结论胶质瘤患者外周血及癌组织T淋巴细胞亚群水平失调，以CD4+ T淋巴细胞百分比降低为主；CD4+ T淋巴细胞多分布于癌组织，CD8+ T淋巴细胞多分布于外周血；癌组织CD4+ T淋巴细胞百分比低的胶质瘤患者肿瘤细胞增殖较快。

关键词：
T淋巴细胞亚群
外周血
病理分级
癌组织
胶质瘤
加入收藏

胶质瘤是常见原发性恶性脑肿瘤，年发病率约为6.4/10万[1]。2021年版WHO中枢神经系统肿瘤分类将胶质瘤分为1～4级，1～2级为低级别胶质瘤，3～4级为高级别胶质瘤[2]。胶质瘤治疗原则为保护功能区前提下最大程度安全切除，同时辅助放化疗、电场治疗、免疫治疗等，但患者生存期仍较短。肿瘤进展与免疫调节失调及微环境变化密切相关；T淋巴细胞亚群是胶质瘤微环境的关键组分之一[3,4]。因此，检测T淋巴细胞亚群辅助胶质瘤早期诊断和预后评估已成为目前临床研究的热点。本研究观察胶质瘤患者外周血及癌组织T淋巴细胞亚群水平变化，探讨其在胶质瘤中的作用，报道如下。

1、资料与方法

1.1 一般资料

2022年12月—2023年8月新疆医科大学第二附属医院诊治胶质瘤患者12例为胶质瘤组，男7例，女5例；年龄28～70岁。纳入标准：(1)术前行头颅MRI检查拟诊为恶性肿瘤，行手术切除治疗，术后组织病理检查确诊为胶质瘤；(2)年龄18～70岁。排除标准：(1)有颅脑损伤、脑炎、脑梗死、神经系统中毒病史者；(2)有自身免疫性疾病、血液系统疾病、严重肝肾疾病者；(3)近1年有输血史，使用免疫抑制剂、糖皮质激素者。同期选择健康体检者11例为对照组。本研究经新疆医科大学第二附属医院伦理委员会批准通过(伦理批准号：2022A072),研究对象均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 临床资料收集

通过电子病历系统记录所有受试者性别、年龄、体质量指数、基础疾病、吸烟史、饮酒史。

1.2.2 标本收集

(1)外周血：胶质瘤组于术前，对照组于体检日采集外周静脉血3 mL,EDTA抗凝，-80 ℃保存。(2)组织：胶质瘤组患者均行手术切除治疗，术中收集癌组织及癌旁正常组织标本，-80 ℃保存。

1.2.3 外周血及癌组织T淋巴细胞亚群水平检测

外周血3 mL加入1 mL红细胞裂解液15 min备用。取癌组织及癌旁正常组织，研磨，细胞悬液通过200目细胞筛过滤到15 mL离心管中，离心半径15 cm, 4 ℃、1 000 r/min离心5 min, 弃上清；用1 mL红细胞裂解液重悬细胞，室温放置7 min, 加入5 mL PBS,离心半径15 cm, 4 ℃、1 000 r/min离心5 min, 弃上清，细胞沉淀用PBS重悬后计数细胞达1×106个/mL。取外周血50 μL、组织细胞悬液100 μL,分别加入抗体PE-CD3 1 μL、FITC-CD4 1 μL、APC-CD8 1 μL标记后，4 ℃避光静置30 min, PBS洗涤后转移至流式细胞管中，应用Fortessa流式细胞仪(美国BD公司)检测T淋巴细胞亚群，采用Fowjo软件分析并记录CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞百分比，计算CD4+/CD8+。

1.2.4 胶质瘤病理分级及癌组织Ki-67表达检测

胶质瘤患者癌组织行组织病理检查并评估WHO分级。12例患者中WHO分级1～2级2例为低级别组，3～4级10例为高级别组。采用免疫组织化学法检测癌组织Ki-67表达情况，<10%为低表达，10%～30%为中表达，>30%为高表达。

1.3 统计学处理

应用SPSS 25.0软件进行统计分析，正态分布计量资料以均数±标准差

表示，2组比较采用独立样本t检验，同组2种标本比较采用配对样本t检验；计数资料比较采用χ2检验；采用Pearson相关法分析胶质瘤患者癌组织T淋巴细胞亚群与Ki-67表达的相关性；检验水准α=0.05。

2、结果

2.1 胶质瘤组与对照组体质量指数、基础疾病等比较

胶质瘤组性别比例、年龄、体质量指数及糖尿病、高血压、吸烟、饮酒比率与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 胶质瘤组与对照组体质量指数、基础疾病等比较

2.2 胶质瘤组与对照组外周血T淋巴细胞亚群比较

胶质瘤组外周血CD4+ T淋巴细胞百分比低于对照组(P<0.05),CD3+、CD8+ T淋巴细胞百分比及CD4+/CD8+与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 胶质瘤组与对照组外周血T淋巴细胞亚群比较

表3 胶质瘤患者癌组织与癌旁正常组织T淋巴细胞亚群比较

图1 胶质瘤患者癌组织与癌旁正常组织T淋巴细胞亚群流式细胞图

2.4 不同级别胶质瘤患者外周血及癌组织T淋巴细胞亚群比较

高级别组外周血CD4+T淋巴细胞百分比低于低级别组(P<0.05),CD8+T淋巴细胞百分比高于低级别组(P<0.05),CD3+T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+与低级别组比较差异均无统计学意义(P>0.05);高级别组癌组织CD4+、CD8+ T淋巴细胞百分比均低于低级别组(P<0.05),CD4+/CD8+高于低级别组(P<0.05),CD3+T淋巴细胞百分比与低级别组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 不同级别胶质瘤患者外周血及癌组织T淋巴细胞亚群比较

2.5 胶质瘤患者外周血与癌组织T淋巴细胞亚群比较

胶质瘤患者癌组织CD3+、CD8+ T淋巴细胞百分比均低于外周血(P<0.05),CD4+ T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+均高于外周血(P<0.05)。见表5。

表5 胶质瘤患者外周血与癌组织T淋巴细胞亚群比较

2.6 胶质瘤患者癌组织T淋巴细胞亚群与Ki-67表达的相关性

胶质瘤患者癌组织Ki-67为(17.27±1.62)%。胶质瘤患者癌组织CD3+T淋巴细胞百分比与Ki-67表达呈负相关(r=-0.669,P=0.024),CD4+T淋巴细胞百分比与Ki-67表达呈正相关(r=0.681,P=0.009),CD8+ T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+与Ki-67表达均无相关性(r=-0.497,P=0.120;r=0.162,P=0.634)。

3、讨论

胶质瘤是常见的颅内恶性肿瘤，复发率、病死率高。T淋巴细胞介导的抗肿瘤免疫反应在抵御肿瘤细胞侵袭、清除肿瘤细胞过程中发挥重要作用。有研究[5]发现，胶质瘤患者体内T淋巴细胞亚群异常，CD4+ 、CD8+ T淋巴细胞呈耗竭状态[6]。本研究探讨胶质瘤患者外周血及癌组织T淋巴细胞亚群水平及意义，为临床诊治提供依据。

CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞在抗肿瘤免疫中发挥重要作用。CD3+T淋巴细胞通过T细胞受体识别肿瘤抗原，参与调节和执行免疫应答。CD4+T淋巴细胞通过释放细胞因子来调节和激活其他免疫细胞，如B细胞和CD8+T淋巴细胞，以增强其对肿瘤细胞的杀伤作用。CD8+T淋巴细胞可直接识别并杀伤肿瘤细胞[7]。Klemm等[5]发现，胶质瘤组织中T淋巴细胞数量减少，CD4+、CD8+T淋巴细胞呈低反应性和无功能表型。本研究结果显示，胶质瘤患者癌组织CD4+、CD8+ T淋巴细胞百分比均低于癌旁正常组织；高级别组癌组织CD4+、CD8+ T淋巴细胞百分比均低于低级别组，CD4+/CD8+高于低级别组。可能机制为胶质瘤患者CD4+T淋巴细胞表面S1P1受体缺失，导致CD4+T淋巴细胞功能缺陷及数量减少，从而抑制肿瘤微环境中CD4+T淋巴细胞介导的免疫反应[8]。胶质瘤中靶向免疫检查点程序性死亡受体配体1可活化T细胞受体，抑制下游PI3K/Akt信号通路，下调细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl表达，进而促进CD8+ T淋巴细胞凋亡并抑制其分泌细胞因子；程序性死亡受体-1抑制RAS-ERK1/2信号通路激活，减少CD8+ T淋巴细胞增殖[9,10]。而高级别组肿瘤负荷更大，侵袭性更强，抗肿瘤免疫效应相对较弱，因此，CD4+、CD8+ T淋巴细胞百分比较低级别组更低；CD4+/CD8+较低级别组更高可能与CD8+ T淋巴细胞增殖受抑制更明显有关。

胶质瘤患者外周血各类T淋巴细胞表型及功能亦呈现出异质性。Marinari等[11]发现，高级别胶质瘤患者外周血CD4+、CD8+ T淋巴细胞数量明显少于正常人群。本研究结果显示，胶质瘤组外周血CD4+ T淋巴细胞百分比低于对照组；高级别组外周血CD4+T淋巴细胞百分比低于低级别组，CD8+T淋巴细胞百分比高于低级别组，提示胶质瘤患者外周血T淋巴细胞亚群表型主要为CD4+ T淋巴细胞比例减少。高级别组癌组织CD8+ T淋巴细胞百分比低于低级别组，但外周血CD8+T淋巴细胞百分比高于低级别组，可能是胶质瘤细胞分泌大量可抑制CD8+T淋巴细胞的因子如神经节苷脂、犬尿氨酸、血管内皮生长因子，使癌组织CD8+ T淋巴细胞数量减少，无法在局部微环境中发挥直接杀伤肿瘤细胞的作用[12]。

目前尚无胶质瘤患者外周血与癌组织T淋巴细胞亚群差异的研究。本研究结果显示，胶质瘤患者癌组织CD3+、CD8+ T淋巴细胞百分比均低于外周血，CD4+ T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+均高于外周血。胶质瘤细胞通过诱导鞘氨醇-1受体1型缺失，诱导CD3+、CD8+T淋巴细胞扩散至外周血，从而导致癌组织CD3+、CD8+T淋巴细胞数量明显减少[13]。上述T淋巴细胞亚群差异可能受患者个体差异、肿瘤生物学特性及临床治疗方式等因素影响。

Ki-67属于核糖体蛋白，反映细胞增殖能力[14]。高级别胶质瘤患者癌组织Ki-67表达升高[15]。研究[16]发现，高级别胶质瘤患者癌组织Ki-67表达与外周血T淋巴细胞数量呈负相关，但该研究未区分T淋巴细胞亚群。本研究结果显示，胶质瘤患者癌组织CD3+T淋巴细胞百分比与Ki-67表达呈负相关，CD4+T淋巴细胞百分比与Ki-67表达呈正相关，提示胶质瘤患者肿瘤细胞生长迅速，CD4+T淋巴细胞耗竭，免疫调控作用减弱。而CD3+T淋巴细胞与Ki-67表达呈负相关的机制尚不清楚，需进一步研究探讨。

本研究结果提示，胶质瘤患者外周血及癌组织T淋巴细胞亚群水平失调，以CD4+ T淋巴细胞百分比降低为主；CD4+ T淋巴细胞多分布于癌组织，CD8+ T淋巴细胞多分布于外周血；癌组织CD4+ T淋巴细胞百分比低的胶质瘤患者肿瘤细胞增殖较快。检测T淋巴细胞亚群可能成为评估胶质瘤患者病情进展和预后的有效方法。但本研究为临床研究，仅初步分析了胶质瘤患者T淋巴细胞亚群水平及分布差异，T淋巴细胞亚群在胶质瘤中的具体作用尚需进行基础实验进一步证实。

参考文献:

[2]中国抗癌协会脑胶质瘤专业委员会.中国抗癌协会脑胶质瘤整合诊治指南(精简版)[J].中国肿瘤临床,2022,49(16):811-818.

基金资助:自治区科技支疆项目(2022E02135);

文章来源:阿衣希塔·奴尔江,邱浩,薛箕山,等.T淋巴细胞亚群在胶质瘤患者外周血及癌组织中水平及意义[J].中华实用诊断与治疗杂志,2024,38(06):607-611.