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2种检测幽门螺旋杆菌感染方法的比较

2024-07-03 66 上传者：管理员

摘要：目的比较2种不同的染色方法对胃镜活检标本中幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染情况的检测效果。方法收集1 039例胃镜活检标本，分别采用免疫组织化学染色法和W-S银染法检测Hp感染情况，2种方法均为阳性时诊断为Hp感染。结果 W-S银染法中Hp着色呈黑色或棕黑色，背景呈淡黄色，对比度差，Hp阳性率为15.9%(165/1039),其中+、++、+++阳性率分别为0.3%(3/1039)、3.4%(35/1039)、12.2%(127/1039),敏感性和特异性均为100%;免疫组织化学染色中Hp着色呈棕色或棕褐色，背景呈白色，对比度较强，Hp阳性率为15.9%(165/1039),其中+、++、+++阳性率分别为0.3%(3/1039)、3.6%(37/1039)、12.0%(125/1039),敏感性和特异性均为100%。结论从Hp着色和背景着色对比比较，免疫组织化学染色法染色效果优于W-S银染法。

关键词：
Hp
W-S银染
免疫组织化学染色
幽门螺旋杆菌
革兰阴性菌
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幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种单极多鞭毛、末端钝圆、菌体呈螺旋形弯曲的革兰阴性菌。在胃黏膜上皮细胞表面呈典型的螺旋状或弧形，通过组织切片或活检组织涂片观察到细菌弯曲更明显。Hp与胃溃疡、胃炎的发生发展密切相关，也是胃癌发生的主要危险因素[1,2,3]。Hp感染后会进一步加重胃黏膜上皮的损伤，若不及时干预，有可能导致上皮内瘤变及肠上皮化生并进行性加重，导致胃癌。我国Hp平均感染率较高，及时、准确诊断Hp感染，有助于早发现、早治疗，对胃癌防治具有积极意义。目前检测Hp感染方法较多，如快速尿素酶试验、13C-尿素呼气试验、美蓝染色法、W-S银染法、Giemsa法以及免疫组织化学法等，但各种方法的特异性和敏感性存在差异。W-S银染法和免疫组织化学法是病理科检测Hp感染的常用方法，我们采用W-S银染法和免疫组织化学法检测胃镜活检标本中Hp感染情况，对两种方法的染色效果进行比较。

1、材料与方法

1.1 材料

收集2023-01—2023-05月北京市延庆区医院胃镜检查时收集的1 039例胃活检组织标本，其中男454例，女585例；年龄23～92岁。

1.2 方法

10%中性福尔马林固定标本，经自动脱水机脱水、浸蜡后，常规石蜡包埋、切片(组织切片厚4 μm),分别行W-S银染和免疫组织化学染色。染色结束后，由2位阅片经验丰富的病理医师进行评估，均使用光学显微镜进行观察，在胃小凹、胃内腺腔或胃黏膜上皮细胞表面等部位出现杆状、逗点状、弧形、“S”形、“C”形散在或集中分布的细菌认定为Hp阳性。参考中国慢性胃炎共识意见(2017版)[3],对W-S银染和免疫组织化学染色进行判读：切片中未见Hp为阴性；偶见或小于标本全长1/3有少数Hp为“+”;Hp分布超过标本全长1/3而未达到2/3或连续性、稀疏存在于上皮表面为“++”;Hp成堆存在，基本分布于标本全长为“+++”。

1.2.1 免疫组织化学染色

Hp抗体(兔多克隆，ZA-0127)和二抗(酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物，PV-6000D)均购自中山金桥公司，4 μm厚连续切片，烤片1 h, 二甲苯浸泡10 min、浸泡2次，梯度乙醇100%、100%、95%、75%各浸泡3 s, EDTA(pH=8.0)修复液浸泡2.5 min, 过氧化氢浸泡10 min, Hp抗体(100 μL)37 ℃孵育1 h, 二抗(100 μL)37 ℃孵育30 min, DAB染色7 min, 随后使用Leica Autostainer XL型全自动HE染色机(购自Leica公司)进行苏木素复染、1%盐酸酒精溶液分化、稀碳酸锂溶液返蓝、梯度无水乙醇脱水、二甲苯透明和封片。

1.2.2 W-S银染法

常规石蜡切片，脱蜡水化，醋酸缓冲液冲洗2次，10 s/次；

将切片放入1%硝酸银液染缸中，56 ℃水浴箱中浸染1 h; 取出切片，此时无需水洗，平放在湿盒上，立即滴加显影液，显影3 min, 此时裸眼观察切片呈金黄色或黄棕色为佳；弃去显影液，56 ℃水中浸洗5 min; 蒸馏水冲洗；无水乙醇脱水；二甲苯透明、中性树胶封片。

1.3 统计学方法

采用SPSS 22.0分析数据，计数资料行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

免疫组织化学染色法中Hp呈棕色或棕褐色(图1～2),阳性率为15.9%(165/1039),其中+、++、+++阳性率分别为0.3%(3/1039)、3.6%(37/1039)、12.0%(125/1039),敏感性和特异性均为100%。W-S银染法中Hp呈黑色或棕黑色，背景呈淡黄色(图3～4),阳性率为15.9%(165/1039),其中+、++、+++阳性率分别为0.3%(3/1039)、3.4%(35/1039)、12.2%(127/1039),敏感性和特异性均为100%。2种方法比较差异无统计学意义(P>0.05)(图5)。

图1 免疫组织化学染色Hp呈棕色或棕褐色（20×）

图2 免疫组织化学染色Hp呈棕色或棕褐色（40×）

图3 W-S银染色Hp呈黑色或棕黑色（20×）

图4 W-S银染色Hp呈黑色或棕黑色（40×）

图5 两种方法检测胃活检标本中Hp感染情况

3、讨论

Hp感染与胃炎、胃溃疡和胃癌的发生发展紧密相关，《第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告》提到Hp阳性感染者需进行根治治疗[4]。检测Hp感染方法较多，可分为非侵入性和侵入性两类[5,6]。非侵入性检测方法无创且简单易操作，如13C-尿素呼气试验；侵入性检测方法需事先进行胃镜下活检，取样后进行后续分析。研究表明[7]胃镜检查联合胃镜所取活检标本共同评估Hp感染情况，特异性和敏感性约100%。

本研究中，我们将胃镜活检标本分别进行免疫组织化学染色和W-S银染，由2位阅片经验丰富的病理医师进行评估，结果发现与W-S银染相比，免疫组织化学的染色效果更为满意。W-S银染方法操作复杂繁琐，并且试剂中所用苯二酚性质不稳定，也不易保存，需要现用现配，另外染色过程中还需要56 ℃水浴箱，染色时间也较长。W-S银染中，Hp被染成黑色或棕黑色，背景呈淡黄色，非特异性染色时背景会出现黑色沉着，在病理医师阅片时容易出现假阳性。免疫组织化学染色中，Hp被染成棕色或棕褐色，背景呈白色，二者对比度较大，更容易观察Hp,同时也可避免出现假阳性。有研究表明[8,9]免疫组织化学染色检测Hp的特异性和敏感性更高。

综上，W-S银染法成本相对较低，但操作步骤繁琐、时间较长，阅片过程中Hp着色与背景色对比度差，影响病理医师的临床诊断。免疫组织化学染色法应用抗原抗体特异性结合的原理，虽然有研究表明其特异性和敏感性优于其他染色方法，但本实验中，我们未发现免疫组织化学染色法的特异性和敏感性优于W-S银染法。免疫组织化学染色法操作简单、用时较短，而且Hp被染成棕色或棕褐色，与背景色对比鲜明，与W-S银染法相比，免疫组织化学染色法优势突出，更易于病理医师的判读，同时也受到病理医师们的青睐。随着全自动染色技术的不断发展，全自动免疫组织化学检测结果更加稳定，重复性更好，可能为Hp免疫组织化学检测结果的可靠性和准确性提供有力保障。

参考文献:

[3]房静远,杜奕奇,刘文忠,等.中国慢性胃炎共识意见(2017年,上海)[J].胃肠病学,2017,22(11):670-687.

[4]刘文忠.“第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告”解读[J].胃肠病学,2017,22(6):321-324.

[7]黄勇,张晓青,金忠芹,等.慢性胃炎组织病理特征和Hp感染与炎症程度的关系研究[J].现代生物医学进展,2017,17(14):2707-2710.

文章来源:翟嘉怡,谷丽娟,佟桂珍,等.2种检测幽门螺旋杆菌感染方法的比较[J].河北北方学院学报(自然科学版),2024,40(08):12-14+18.