地中海贫血（thalassemia）是人类最常见的单基因遗传疾病之一[1]。这类疾病是由于珠蛋白基因突变或缺失导致血红蛋白 α 链与 β 链的合成比例失衡，使红细胞内不能产生足够的有正常分子结构的血红蛋白，从而造成溶血性贫血和携氧能力降低[2]。根据异常基因的种类，地中海贫血主要为 α、β、δβ 和 δ 四大类，其中以 α 和 β 地中海贫血较为常见[3]。全球大约有5%的人口为地中海贫血基因突变的携带者，尤其是热带和亚热带是地中海贫血高发地区，其中我国广东、广西、云南、四川等省份发病率较高[4]。目前临床上常规使用的地中海贫血基因突变检测试剂盒的检测范围已能覆盖我国南方地区人群 α、β 地中海贫血基因突变的主要类型[5]。但是，地中海贫血的分子基础复杂、临床表型多样、突变类型繁多，在日常的临床工作中经常发现罕见或未知突变类型[6]。然而，鲜有人研究报道惠州市惠阳地区人群的地中海贫血罕见基因突变谱，因此对于常规基因检测结果与血液学表型不符时，通过进一步基因测序的方法，以明确诊断减少地中海贫血的漏诊或误诊，同时完善该地区的地中海贫血基因突变谱[7]。

本研究在对2022年6月至2023年12月惠阳地区各医疗机构以及婚检中心送至我院的地中海贫血基因检测标本进行常规筛查时，针对常规基因检测结果与血液学表型不符的标本，进一步行地中海贫血基因稀有缺失型电泳，以及 α1、α2和 β 基因测序，以检出其他罕见的基因突变型，提高地中海贫血筛查的准确性，减少地中海贫血的漏诊或误诊，同时完善该地区的地中海贫血基因突变谱，为当地地中海贫血防控提供相关依据。

1、资料与方法

1.1一般资料

该研究总共纳入4214例研究对象，均是2022年6月至2023年12月惠阳地区各医疗机构及婚检中心送至我院的地中海贫血基因受检者，其中男1896例，女2318例 ；年龄在2～61岁，平均（29.46±4.84）岁，男性平均年龄（29.00±4.20）岁，女性平均年龄（29.86±5.64）岁 ；体重指数18.92～25.87 kg/m2，平均（21.59±2.03）kg/m2；受教育程度 ：初中及以下1583例，高中或中专1644例，大专及以上987例 ；居住地 ：农村1641例，城镇2573例。该研究通过伦理委员会的批准，伦理审批号为20220428。纳入标准 ：均同意行地中海贫血基因检测者 ；意识清醒、精神正常，可与检测人员简单沟通者且受检者家属了解研究的全部流程，并且愿意参加研究 ；入组前1周未服用过抗凝血等影响血液指标药物者。排除标准 ：心脏、肾脏等功能严重不全者 ；并发肺炎或其他急性重症传染病者 ；凝血功能异常者 ；受检者精神异常或存在沟通障碍 ；受检者病历资料不齐全或中途退出研究。

1.2方法

1.2.1主要仪器与试剂

（1）仪器 ：潮州凯普HB2012A型医用核酸分子快速杂交仪（生产单位 ：广东凯普生物科技股份有限公司 ；型号 ：HB2012A；注册证号 ：粤潮械备20172220109；规格1～30人份），杭州博日TC-96/G/H（b）荧光定量聚合酶链反应（PCR）仪[生产单位 ：杭州博日科技股份有限公司 ；型号 ：TC-96/G/H（b）B；注册证号 ：国械注准20153220273；规格 ：FQD-96A]，美国BIO-RAD全自动凝胶成像分析系统（生产单位 ：深圳市宇德立生物科技有限公司 ；型号 ：美国BIO-RAD），北京六一双稳定时电泳仪（生产单位 ：上海双旭电子有限公司 ；型号 ：DYY2C），济南鑫贝西BSC-1500ⅡA2-X生物安全柜（生产单位 ：济南欧莱博科学仪器有限公司 ；型号 ：BSC1500ⅡA2-X；注册证号：国械注准20143542263），美国ABI 3730测序仪（生产单位 ：北京东讯天地医疗仪器有限公司 ；型号 ：ABI 3730）。（2）试剂 ：潮州凯普血液基因组DNA提取试剂盒（离心柱型），潮州凯普 α、β 地中海贫血基因检测试剂盒（PCR+导流杂交法），深圳凯杰PCR扩增试剂，美国ABI PCR扩增试剂，北京赛百盛Goodview核酸染料，西班牙Regular Agarose G-10琼脂糖，日本TAKARA DL2，000 DNA Marker，日本TaKaRa 10×电泳缓冲液。•

1.2.2检测方法

（1）外周血白细胞基因组DNA提取 ：采用潮州凯普生物化学有限公司生产的DNA提取试剂盒（离心柱法）提取受检者的外周血白细胞基因组DNA，－20℃保存备用。

（2）地中海贫血基因常规检测 ：采用潮州凯普生物化学有限公司生产的 α、β 地中海贫血基因检测试剂盒（PCR+导流杂交法）检测受检者3种常见缺失型 α 地中海贫血（--SEA、-α3.7和-α4.2）、3种常见点突变型 α 地中海贫血（CS，QS和WS）和19种常见点突变型 β 地中海贫血（CD41-42，IVS-Ⅱ-654，28，CD17，CD71-72，βE，-29，-30，CD43，CD27-28，CD14-15，CD31，-32，IVS-Ⅰ-1（G-T，G-A），IVS-Ⅰ-5，CAP，Int，Cap+40-43，Cap+1）。

（3）稀有基因型的电泳分析 ：针对常规基因检测结果与血液学表型不符的受检者标本，将标本送至潮州凯普生物化学有限公司进行 α 基因稀有缺失型、α 三联体和血红蛋白持续增多症缺失型琼脂糖凝胶电泳分析。

（4）α1、α2和 β 基因测序 ：针对常规基因检测结果与血液学表型不符的受检者标本，将标本送至潮州凯普生物化学有限公司进行 α1、α2和 β 基因外显子测序。

1.3观察指标

（1）统计广东惠阳地区人群地中海贫血基因携带情况。

（2）统计罕见型地中海贫血基因及基因突变类型，其中罕见地中海贫血基因及基因突变类型有 α 珠蛋白基因突变、β 珠蛋白基因突变、α 复合 β 珠蛋白基因突变。α 珠蛋白基因突变类型有IVSⅡ-55 T＞G位点突变杂合子、--THAI、CD30 -GAG位点杂合突变子、HKαα、IVSⅡ-34G＞A位点突变杂合子、αααanti3.7、αααanti4.2、IVSⅡ-81 G＞A位点突变杂合子、217 insC（CD72 +C）、CD30 GAG＞CAG位点突变杂合子、CD16 AAG＞AAT位点突变杂合子、CD74 GAC＞CAC位点突变杂合子、IVSⅡ-119-126 -CTCGGCCC＞+G位点突变杂合子。β 珠蛋白基因突变类型有ChineseGγ+（Aγδβ）0、CD113 GTG＞GAG位点突变杂合子、Southeast Asian（Vietnamese）deletion、IVSⅠ-70 C＞A位点杂合突变子、IVSⅡ-809 C＞T位点杂合突变子、IVSⅠ-2 T＞C位点杂合突变子、CD7 GAG＞AAG位点突变杂合子、CAP +8 C＞T位点复合CD113 GTG＞GAG位点突变杂合子、CD56 GGC＞GAC位点突变杂合子、IVSⅡ-672 A＞C位点突变杂合子、IVSⅡ-283G＞A位点突变杂合子、IVSⅡ-180 T＞C位点突变杂合子、IVSⅡ-300-308AAAAAAAAA＞AAAAAAAA位点突变杂合子。α 复合 β 珠蛋白基因突变类型为 α 基因IVSⅡ-55 T＞G位点突变杂合子合并 β 基因IVSⅡ-180 T＞C位点突变杂合子。

1.4统计学分析

组间差异采用 χ2检验和Fisher精确检验。生存数据采用log-rank检验进行Kaplan-Meier分析组间差异，使用SPSS 26.0和GraphPadPrism7进行统计学分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1广东惠阳地区人群地中海贫血基因携带情况

共收集地中海贫血基因检测样本4214例，检出地中海贫血基因样本1388例，检出率为32.94%（1388/4214）。α 地中海贫血基因检出921例， 检 出 率 为21.86%（921/4214），其中，缺失型 α 地中海贫血基因检出829例，检出率为19.67%（829/4214）；非缺失型 α地中海贫血基因检出85例，检出率为2.02%（85/4214）；缺失型合并非缺失型 α 地中海贫血基因检出7例，检出率为0.17%（7/4214）。β 地中海贫血基因检出407例，检出率为9.66%（407/4214）。α 合并 β 地中海贫血基因检出60例，检出率为1.42%（60/4214）。男、女性地中海贫血基因检出率分别为34.28%（650/1896）和31.84%（738/2318），二者比较差异无统计学意义（P＞0.05）。地中海贫血基因检测结果见表1。

2.2α 和 β 珠蛋白基因罕见突变型的检出情况

在送检的4214例检测样本中，共检出44例罕见型地中海贫血，包括20例 α 珠蛋白基因突变、23例 β 珠蛋白基因突变和1例 α 复合 β 珠蛋白基因突变。44例罕见型地中海贫血的基因突变类型详见表2。

3、讨论

地中海贫血又被称为珠蛋白生成障碍性贫血或海洋性贫血，是临床常见的遗传性溶血性疾病，主要是由于珠蛋白基因缺陷致使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或者不能合成，导致血红蛋白的组成成分改变的常染色体不完全显性遗传病[8-9]。地中海贫血通常以存在珠蛋白生成障碍性贫血家族史人群为主要患病群体，呈世界性分布，以地中海沿岸国家和东南亚各国多见，在我国长江以南各省均有报道，以广东、广西、海南、四川、重庆等地区发病率较高，在北方较为少见[10-11]。患者发生地中海贫血后，易出现皮肤苍白、头颅大、乏力、眼距宽、黄疸等症状，若未及时治疗可诱发铁过载、易感染、心脏问题、骨异常等并发症，病情严重者可死亡[12-13]。因此，临床加强对地中海贫血的早期筛查及治疗是十分必要的。该研究对广东惠阳地区4214例受检者进行地中海贫血基因检测，结果显示地中海贫血基因检出率为32.94%，其中 α 地中海贫血基因检出率为21.86%、β 地中海贫血基因检出率为9.66%、α 合并 β 地中海贫血基因检出率为1.42%，这与沈璇等[14]研究报道相似。由此看出，广东惠阳地区地中海贫血基因的检出率相对较高，且主要以 α 地中海贫血基因、β 地中海贫血基因为主，广东惠阳地区相关部门应加大 α 地中海贫血基因、β 地中海贫血基因的筛查力度，对育龄期群体做好婚前体检、产前体检、遗传咨询等宣教工作，以预防 α 地中海贫血、β 地中海贫血的发生，进而提高出生人口质量[15]。随着医疗水平的提升和分子诊断技术的进步，再加上临床对地中海贫血基因筛查的深入研究，一些罕见基因突变型不断被发现，为临床研究地中海贫血基因提供新方向、新思路[16]。该研究结果显示，4214例样本中总共检出44例罕见型地中海贫血（检出率为1.04%），包括 α 珠蛋白基因突变20例（检出率0.47%）、β 珠蛋白基因突变23例（检出率0.55%）、α复合β珠蛋白基因突变1例（检出率0.02%），其中α珠蛋白基因罕见突变以IVSⅡ-55

T＞G位点突变杂合子、HKαα、CD30 -GAG位点杂合突变子和--THAI为主，β 珠蛋基因罕见突变以ChineseGγ+（Aγδβ）0、CD113 GTG＞GAG位点突变杂合子和Southeast Asian（Vietnamese）deletion为主，由此看出，惠阳地区罕见型地中海贫血基因检出率相对不高，但对于罕见基因携带者与常见同型的 α 或 β 地中海贫血基因携带者结婚时，需进一步做产前罕见基因型检测，避免中重型地中海贫血患儿的出生[17]。同时，此次研究发现，α 珠蛋白基因的IVSⅡ-119-126 -CTCGGCCC＞+G位点突变杂合子、β 珠蛋白基因的IVSⅡ-283G＞A位点突变杂合子和IVSⅡ-300-308 AAAAAAAAA＞AAAAAAAA位点突变杂合子是此次研究新发现的基因突变类型，提

表1广东惠阳地区人群地中海贫血基因检测结果[例（%）]

性别 检测例数 地中海贫血基因例数

表2α和β珠蛋白基因罕见突变型的检出情况

这些罕见地中海贫血基因突变的发现，对于丰富地中海贫血基因的突变谱、构建地中海贫血基因诊断方法具有重要意义。

综上所述，惠阳地区地中海贫血的发病率较高，地中海贫血基因类型较为复杂，其中 α 地中海贫血基因、β 地中海贫血基因是常见类型，而罕见型地中海贫血基因的占比相对较低。虽然罕见型地中海贫血基因的占比不高，但惠阳地区相关部门应加大地中海贫血基因筛查工作的力度，明确地中海贫血罕见基因突变型，不断丰富该地区地中海贫血罕见基因突变谱，为该地区优生优育咨询及防控提供参考依据，从而减少地中海贫血的发生。

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基金资助:惠州市医疗卫生领域科技计划项目(2022CZ010318);

文章来源:王健,谢国生,叶秋香,等.惠阳地区地中海贫血罕见基因突变型检出情况分析[J].中国医药指南,2024,22(36):1-5.