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银杏内酯B注射液对ITP患者T细胞亚群、MDSCs免疫失衡的影响

2025-03-26 14 上传者：管理员

摘要：目的探究原发免疫性血小板减少症（ITP）患者应用银杏内酯B注射液治疗对T细胞亚群和髓源性抑制细胞（MDSCs）免疫失衡的影响。方法选取2021年12月至2023年12月廊坊市中医医院收治的132例ITP患者作为研究对象，将其随机分为研究组（n=66）和对照组（n=66）。给予对照组利妥昔单抗治疗，给予研究组银杏内酯B注射液治疗，两组治疗周期均为14 d。对比两组疗效；对比两组治疗前后Th1/Th2细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素（IL）-4、IL-10]、MDSCs、Treg/Th17水平；对比两组不良反应发生率。结果研究过程中，对照组3例患者退出研究，研究组1例患者退出研究，最终对照组纳入63例，研究组纳入65例。研究组（95.38%）治疗总有效率高于对照组（74.60%）(P<0.05)。治疗后，两组TNF-α、IFN-γ、Th17均降低（P<0.05）,IL-4、IL-10、MDSCs、Treg和Treg/Th17均升高（P<0.05）；与对照组比较，研究组TNF-α、IFN-γ、Th17水平均降低（P<0.05）,IL-4、IL-10、MDSCs、Treg和Treg/Th17均升高（P<0.05）。与对照组（26.98%）比较，研究组（9.23%）总不良反应发生率降低（P<0.05）。结论应用银杏内酯B注射液治疗ITP患者，可提升患者临床疗效，改善Th1/Th2细胞因子和MDSCs免疫失衡，且不会增加患者不良反应发生率。

关键词：
Th1/Th2细胞因子
原发免疫性血小板减少症
调节性T细胞
辅助性T细胞17
银杏内酯B注射液
髓源性抑制细胞
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原发免疫性血小板减少症（primary immunethrombocytopenia, ITP）是一种以血小板损伤及造血功能下降为主要特征的自身免疫病，该病的发生与抗血小板抗体、巨核细胞以及T淋巴细胞均有关，这些因素均可导致血小板损伤，且各发病机制存在差异[1]。已有研究发现，ITP患者体内产生的自身抗体与血小板膜表面的特定抗原发生免疫反应，促进血小板的损伤[2]。越来越多的研究显示，ITP与调控免疫系统的失调密切相关，对于初次确诊的ITP患者，单纯应用糖皮质激素药物治疗可取得较好的近期疗效，但仍有较多的患者会出现药物依赖性或严重不良反应，进而发展为难治性ITP[3]。对于一些常规治疗无效或耐药的ITP患者而言，利妥昔单抗是一种有效的治疗选择，但该药物易导致患者出现不良反应，进而降低患者的服药依从性[4]。银杏内酯B是一种中药提取物，已有研究证实其在缺血性脑卒中、血栓等疾病中的作用，可有效降低血小板激活因子[5]，但银杏内酯B注射液在ITP治疗中的研究较少。基于此，本研究选取ITP患者作为研究对象，分析银杏内酯B注射液的治疗效果及应用价值。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2021年12月至2023年12月廊坊市中医医院收治的ITP患者，共计132例，随机分为研究组和对照组，每组66例。对照组和研究组相关基线资料比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），两组具有可比性，详见表1。患者及家属对本研究方案了解且签署知情同意书，本研究已获得廊坊市中医医院伦理委员会批准（批准号：2021-0606）。

表1两组患者一般资料

1.2纳入标准

（1）符合ITP诊断标准[6]。 ①多次化验检查血小板计数减少；②脾脏不增大或仅轻度增大；③骨髓检查巨核细胞数增多或正常，有成熟障碍；④泼尼松或切脾治疗有效、血小板寿命测定缩短。（2）血小板计数<30×109/L。（3）临床资料完整。

1.3排除标准

（1）合并其他免疫病。（2）合并严重肝、肾功能损害。（3）合并病毒感染。（4）既往已接受本研究药物治疗。

1.4治疗方法

1.4.1对照组

给予患者利妥昔单抗（德国罗氏诊断有限公司，国药准字：SJ20160030，规格：500 mg/50 mL）治疗，静脉滴注100 mg/次，1次/周，共4次。治疗前给予25 mg苯海拉明（北京中新药业股份有限公司，国药准字：H13020674，规格：25 mg）、5 mg地塞米松（湖北美林药业有限公司，国药准字：H42020620，规格：1 mL∶5 mg）抗过敏处理，均在利妥昔单抗输注前30 min给药，每次输注利妥昔单抗前均需使用。泼尼松（江西国药有限责任公司，国药准字：H12020689，规格：5 mg）：1 mg/（kg·d），4次/d，病情稳定后，逐渐减少用量。

1.4.2研究组

给予患者银杏内酯B注射液[成都百裕制药股份有限公司，国药准字：Z20110035，规格：每支装2 mL（含萜类内酯10 mg）]，静脉滴注20 mL银杏内酯B与250 mL 50 g/L葡萄糖液混合液，每日1次。

1.4.3疗程

两组均治疗8周。

1.5观察指标

1.5.1临床疗效

痊愈：治疗后，患者无任何出血表现且血小板计数≥100×109/L；有效：治疗后，患者无任何出血表现且血小板计数≥30×109/L（相较基础水平增加2倍）；无效：治疗后，患者未达到上述标准[7]。总有效率=痊愈率+有效率。

1.5.2 Th1/Th2细胞因子

治疗前后采集患者空腹肘静脉血5 mL，3 500 r/min离心10 min（离心半径为7.5 cm）。取上层血清，采用美国Biorad酶标仪测定肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNFα）、干扰素-γ（interferon-γ, IFN-γ）、白细胞介素（interleukin, IL）-4和IL-10因子水平。

1.5.3髓源性抑制细胞（myeloid suppressor cells，MDSCs）

治疗前后采集空腹肘静脉血5 mL，给予肝素抗凝，以3 000 r/min离心6 min（离心半径为15 cm），离心完毕后分离上层液并丢弃。将PBS洗涤液提前冷处理，以辅助细胞沉淀，加入500μL结合缓冲液重悬细胞，再依次加入Annexin V-FITC与PI各5μL，混匀后静置10 min。采用流式细胞仪对MDSCs进行检测，并在光学显微镜下观察，计算MDSCs比例。

1.5.4 Treg/Th17细胞比例Treg细胞标记：

将外周血单个核细胞与单克隆抗体混合，同时将其置于避光环境内孵育10 min，将固定剂加入后与叉头框蛋白质3（forkhead box protein 3, FOXP3）单克隆抗体混匀，并将其置于避光环境内孵育，30 min后将上清液弃除并将PBS缓冲液加入。Th17细胞标记：将外周血单个核细胞置于条件为37℃、5% CO2中孵育，5 h后离心并将上清液弃除，将固定剂加入并于Th17单抗体中混匀，同时将其置于避光环境下，孵育30 min后行离心操作并将PBS缓冲液加入。采用流式细胞仪检测标本中Treg、Th17含量，并计算Treg/Th17细胞比例。

1.5.5不良反应

记录两组患者治疗期间发热、寒战、头痛、恶心/呕吐情况。

1.6统计学分析

采用SPSS 26.0处理数据。计量资料行正态检验，均符合正态分布，以“x±s”表示，组间/组内比较采用独立/配对t检验。计数资料采用“例（%）”表示，行 χ2检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2、结果

2.1两组患者疗效比较

研究过程中，对照组3例患者退出研究，研究组1例患者退出研究，最终对照组纳入63例，研究组纳入65例。研究组总有效率为95.38%，显著高于对照组的74.60%（P<0.05）。详见表2。

表2两组患者疗效比较

2.2两组患者治疗前后Th1/Th2细胞因子比较

治疗前，两组TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。治疗后，两组TNF-α、IFN-γ 水平均较治疗前降低（P<0.05），IL-4、IL -10水平均较治疗前升高（P<0.05）；且研究组TNF-α、IFN-γ 水平低于对照组（P<0.05），IL-4、IL10水平高于对照组（P<0.05）。详见表3。

2.3两组患者治疗前后MDSCs比较

治疗前，两组MDSCs差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后，两组MDSCs均较治疗前升高（P<0.05）；且研究组MDSCs高于对照组（P<0.05），详见表4。

表4两组患者治疗前后MDSCs比较

表3两组患者治疗前后Th1/Th2细胞因子变化

2.4两组患者治疗前后Treg、Th17及Treg/Th17比较

治疗前，两组Treg、Th17、Treg/Th17差异均无统计学意义（P＞0.05）。治疗后，两组Treg和Treg/Th17均较治疗前升高（P<0.05），Th17均较治疗前降低（P<0.05）；且研究组Treg和Treg/Th17高于对照组（P<0.05），Th17低于对照组（P<0.05）。详见表5。

表5两组患者治疗前后Treg、Th17及Treg/Th17比较

2.5两组患者不良反应发生率比较

研究组总不良反应发生率（9.23%）低于对照组（26.98%）（P<0.05）。详见表6。

表6两组患者不良反应发生率比较

3、讨论

ITP是一种自身免疫性疾病，其致病机制尚未完全明确。ITP以T细胞功能紊乱为主要病理特点，引起血小板破坏增加、巨核细胞发育不良[8]。目前认为，ITP的发病机制为抗血小板抗体与血小板相互作用，并与其表面Fc型受体发生相互作用[9]。以往研究表明，ITP的发生与机体的体液免疫紊乱、血浆中的血小板结合性抗体增多、血小板被破坏等因素有关[10]。近年来，免疫学和分子生物学等研究表明，T淋巴细胞在ITP发病中起重要作用[11]。

MDSCs是一种异质性的未成熟髓系细胞，可产生IL等免疫抑制因子，而炎性环境可能促进ITP患者MDSC的增加[12]。本研究结果发现，相较于对照组，研究组MDSCs比例更低，且研究组总有效率更高。分析其原因可能是银杏内酯B作为一种中药提取物，主要自银杏叶中提取分离，对血小板活化因子有明显的抑制效应[13]。银杏内酯B可以调节免疫细胞的活性，降低自身免疫反应的强度，减少自身抗体对血小板的攻击和破坏。LI等[14]研究发现，在血小板活化因子受体于机体作用过程中，可参与炎症、免疫等生理过程，而银杏内酯B可与其发生相互作用，调控血小板活化因子诱导血小板激活，对血栓的形成有一定的抑制作用，从而发挥保护血管内皮细胞的效果，同时机体炎症效应的改善也间接导致MDSCs比例下降。此外，银杏内酯B可以调节免疫细胞的活性，降低自身免疫反应的强度，减少自身抗体对血小板的攻击和破坏[15]。银杏内酯B还可通过下调氧化低密度脂蛋白介导的炎症相关基因的表达，抑制核因子 κB的激活[16]。

Th1分泌TNF-α、IFN-γ 等细胞因子，可介导细胞免疫反应；Th2细胞主要分泌IL-4、IL-10等细胞因子，可介导体液免疫反应。本研究结果发现，相较于对照组，研究组TNF-α、IFN-γ 水平更低，IL-4、IL-10水平更高。银杏内酯B具有较强的抗氧化能力，且在机体中可与血小板因子发生反应，进而减轻自由基对血小板的损伤，保护血小板的完整性和功能[17]。此外，银杏内酯B可维持ITP患者血管内皮的正常生理功能，为血小板提供良好的生存环境，促进其正常黏附、聚集，释放反应，进而促进血小板生成，改善T细胞亚群细胞因子[15]。本研究结果表明，治疗后，两组Treg、Treg/Th17均升高，Th17均降低，且相较于对照组，研究组Treg、Treg/Th17更高，Th17更低。分析原因，可能是银杏内酯B可通过多种途径刺激造血干细胞分化为血小板，增加血小板的数量，抑制血小板活化和聚集，避免血栓形成和血小板的过度消耗[18]。总之，银杏内酯B注射液对ITP的作用机制具有多面性，其通过免疫调节、抗氧化应激以及改善血管内皮功能等多种方式，有效促进血小板的生成和功能恢复。然而，在使用银杏内酯B注射液或其他相关药物时，必须严格遵循医生的专业建议，并结合患者的具体个体情况进行科学评估和治疗。

综上所述，应用银杏内酯B注射液治疗ITP患者，可显著提升患者临床疗效，改善Th1/Th2细胞因子、MDSCs及免疫失衡情况，提升临床治疗安全性。本研究为单中心研究、未对ITP患者进行随访，无法判定银杏内酯B注射液的长期效果。因此，未来应采用多中心样本，增加随访时间，进一步证实银杏内酯B注射液对ITP的临床应用价值。

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