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PPP1R14B在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

2024-11-15 2 上传者：管理员

摘要：目的:研究蛋白磷酸酶1调节亚基14B(protein phosphatase1 regulatory subunit 14B,PPP1R14B)在子宫内膜癌组织中的表达情况，并探讨其临床意义。方法:收集本院85例作为研究对象，术中收集患者的癌组织和癌旁组织，免疫组化法检测PPP1R14B蛋白表达，RT-qPCR检测PPP1R14B mRNA表达水平，分析PPP1R14B表达与临床病理特征的关系，采用Kaplan-Meier法分析PPP1R14B表达与患者生存率的关系，多因素Cox回归分析影响子宫内膜癌患者预后的危险因素。结果:子宫内膜癌组织中PPP1R14B阳性表达率及PPP1R14B mRNA表达明显高于癌旁组织(P<0.05);PPP1R14B表达与年龄、病理分级、FIGO分期、淋巴结转移、组织分化程度有关(P<0.05);PPP1R14B mRNA高表达患者5年生存率显著低于PPP1R14B mRNA低表达患者(P<0.05);且年龄、病理分级、FIGO分期、淋巴结转移和PPP1R14B高表达水平是预后独立危险因素(P<0.05)。结论:PPP1R14B在子宫内膜癌患者组织中高表达，与年龄、病理分级、FIGO分期、淋巴结转移和预后密切相关，是影响患者预后的重要因素。

关键词：
PP1
PPP1R14B
临床病理特征
子宫内膜癌
蛋白磷酸酶1
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子宫内膜癌是普遍多见的妇科恶性生殖道肿瘤，好发于围绝经期及绝经后女性，绝经后女性约占70%以上[1]。子宫内膜癌具有较高的发病率和死亡率，而且近年来的发病率和死亡率呈上升趋势，其发生和发展比较复杂，是多因素、多阶段和多机制作用的结果[2]。从复杂增生子宫内膜到子宫内膜的不典型增生，再到子宫内膜癌有着一个较长的病变期[3],而且有一定的可逆性，所以早期诊断并制定合理化治疗方案尤为重要。子宫内膜癌具有比较复杂的致病过程，发病风险的增加与癌基因突变的发生及基因的多态性改变有关[4]。癌基因在人类基因组中通常处于抑制状态，即使人类的抑癌基因发挥抑制作用，当两者任何一种基因因为某种原因发生改变，都将导致肿瘤的形成[5]。蛋白磷酸酶1(protein phosphatase 1,PP1)是主要的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶之一，在细胞存活和分化等方面具有重要的调控作用[6]。蛋白磷酸酶1调节亚基14B(protein phosphatase1 regulatory subunit 14B,PPP1R14B)是一种17 kDa的PP1抑制剂磷酸化蛋白[7]。相关研究报道，PPP1R14B在卵巢透明细胞癌中高表达[8],由此推出PPP1R14B可能在肿瘤中具有重要的作用。因此本研究旨在探讨PPP1R14B在子宫内膜癌中的表达及意义。

1、资料和方法

1.1 一般资料

选取2018年12月至2019年5月入本院行手术治疗的子宫内膜癌患者85例作为研究对象，术中收集患者的癌组织和癌旁组织(距离病灶边缘5 cm以上)。纳入标准：①经病理诊断为子宫内膜癌；②所有患者均为初发患者，都进行手术治疗；③术前无治疗，签订知情同意书。排除标准：①合并其他恶性肿瘤患者；②血液类系统疾病以及免疫类系统疾病患者；③非首次手术患者；④孕妇和哺乳期女性；⑤中途失访者。本研究中所有患者均签署知情同意书，本研究经过我院医学伦理委员会审核，编号：(2022)伦审第(086)号。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化法检测PPP1R14B蛋白表达

将癌组织蜡块以4 μm厚度连续切片，将切片烘烤2 h; PBS冲洗，然后进行抗原修复，PBS冲洗，用3%H2O2滴加在每张组织切片上，室温孵育15 min, PBS液冲洗滴加非免疫的动物血清封闭，37 ℃孵育10 min, 滴加PPP1R14B一抗，稀释浓度为1∶500,4 ℃过夜，PBS冲洗，滴加生物素标记的二抗，室温下孵育20 min, PBS冲洗，滴加链霉素抗生物蛋白，室温下孵育20 min, 滴加DAB显色剂，自来水冲洗，置入苏木素中复染12 min, 分化，氨水返蓝和脱水，二甲苯中透明，烤干，光学显微镜下进行观片。PPP1R14均位于细胞质，细胞质出现棕黄色颗粒或棕褐色颗粒为阳性。以阳性细胞染色的强度及数量来综合评判。依据染色的强度：未染色的记0分，淡黄色的记1分，棕黄色的记2分，棕褐色为3分。依据着色细胞的百分数进行计分：<5%的为0分，5%～25%为1分，>25%～50%为2分，>50%～75%为3分，>75%为4分。以染色的强度和着色细胞的百分数乘积作为综合评分结果，阳性表达≥4分。

1.2.2 RT-qPCR检测子宫内膜癌组织中PPP1R14B mRNA表达水平

用TRIzol 法提取癌组织和癌旁组织的总 RNA,并进行RNA浓度测定，反转录为cDNA,以 cDNA 为模板进行 PCR 扩增，实时PCR系统上进行定量分析，引物序列为：5'-GACGATGAGGGCCCAGTG-3'(正向),5'-TCCTCTTCCTGGCAGTCGTA-3'(反向),按PowerUp SYBR Green Master Mix试剂盒说明书对PPP1R14B mRNA 进行 RT-qPCR 检测。以95 ℃,30 s预变性，95 ℃,15 s变性，60 ℃共计40个循环，以GAPDH作为内参，以2-ΔΔCt值计算PPP1R14B mRNA相对表达量。

1.2.3 随访

对85例患者门诊或者电话等多种方式进行随访，截止时间为2024年5月，随访时间为6～60个月，其中死亡20例。

1.3 统计学方法

采用SPSS 24.0 软件进行数据处理，计数资料以频数(百分数)[n(%)]表示，采用χ2检验；计量资料采用均数±标准差

表示，采用t检验；绘制Kaplan-Meier曲线进行生存分析；采用Cox回归分析影响患者预后的危险因素，P<0.05 表示差异具有统计学意义。

2、结果

2.1 PPP1R14B在子宫内膜癌组织中的表达

子宫内膜癌组织中PPP1R14B阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05)(表1和图1)。子宫内膜癌组织和癌旁组织中PPP1R14B mRNA 表达分别为2.13±0.65和0.57±0.11,子宫内膜癌组织中PPP1R14B mRNA 表达明显高于癌旁组织 (P<0.05)。

表1 PPP1R14B在子宫内膜癌组织和癌旁组织中的阳性表达

图1 PPP1R14B在癌组织和癌旁组织中的表达(免疫组化染色)

2.2 PPP1R14B表达与临床病理特征的关系

年龄>50岁患者的PPP1R14B阳性占比明显高于≤50岁的患者(P<0.05),病理分级G2-G3级患者的PPP1R14B阳性占比明显高于G1级(P<0.05),FIGO分期Ⅱ-Ⅲ期患者的PPP1R14B阳性占比显著高于Ⅰ期(P<0.05),淋巴结转移患者的PPP1R14B阳性占比明显高于非淋巴结转移患者(P<0.05),低分化患者的PPP1R14B阳性占比明显高于中高分化患者(P<0.05),但PPP1R14B阳性占比与肿瘤直径、病理类型、浸润深度无关(P>0.05)(表2)。

表2 PPP1R14B表达与临床病理特征的关系

2.3 子宫内膜癌中PPP1R14B mRNA表达与患者预后的关系

85例患者中，PPP1R14B mRNA高表达患者中5年内生存42例，死亡17例，5年生存率为71.19%;PPP1R14B mRNA低表达患者中5年内生存23例，死亡3例，5年生存率为88.46%,PPP1R14B mRNA高表达患者5年生存率显著低于PPP1R14B mRNA低表达患者(P<0.05)(图2)。

2.4 Cox 比例风险回归模型分析

单因素分析结果显示，年龄、病理分级、PPP1R14B表达水平、FIGO分期、淋巴结转移、组织分化程度可能影响到患者预后(P<0.05);将单因素中具有统计学意义的纳入多因素 Cox 回归分析，结果显示，年龄、病理分级、FIGO分期、淋巴结转移和PPP1R14B高表达水平是子宫内膜癌预后的独立危险因素(P<0.05)(表3)。

图2子宫内膜癌中PPP1R14B mRNA表达与子宫内膜癌患者预后的关系

表3单因素和多因素分析子宫内膜癌患者预后影响因素

3、讨论

子宫内膜癌是一类上皮恶性肿瘤，起源于子宫内膜，占女性恶性肿瘤的7%,严重威胁着女性的健康[9]。子宫内膜癌好发于绝经后妇女，大部分患者的症状比较明显，包括下腹痛、阴道出血等[10],因此早期诊断和规范化治疗，生存率获得明显提高。子宫内膜癌组织学类型分为浆液性癌、透明细胞癌、子宫内膜样癌、混合性癌和癌肉瘤，未分化和去分化癌及少见的组织学类型包括其中。子宫内膜样腺癌预后较好，透明细胞癌、浆液性癌预后较差[11]。该分型结合了患者预后情况和肿瘤病理类型，为判断患者预后提供了更加详实的理论依据，随着分子病理学的快速发展，子宫内膜癌的分子改变成为了研究热点之一[12]。因此探讨该病分子发病机制、治疗有效药物、预后指标等，具有十分重要的意义。

PPP1R14B属于 PP1蛋白磷酸酶亚家族[13]。PP1是PPP 蛋白磷酸酶家族中最广泛的一员，参与多种信号通路的调节，调控机体组织分化、发育和内部细胞周期和基因表达等生理功能[14]。研究表明，PP主要包括PPP1R14A、PPP1R14B、PPP1R15A、PPP1R15B等[15],可能与机体免疫系统相关，能够参与机体免疫应答[16]。相关研究表明，PPP1R14B 在免疫细胞中高表达，参与机体免疫系统作用[17]。目前关于PPP1R14B在肿瘤中的相关报道较少，因此本研究探讨PPP1R14B子宫内膜癌组织中的表达，以及对预后的影响，对子宫内膜癌的生存质量具有重要意义。

本研究结果显示，癌组织中PPP1R14B阳性表达率明显高于癌旁组织，PPP1R14B mRNA 表达也明显高于癌旁组织，说明PPP1R14B高表达与子宫内膜癌发生发展有关。相关研究表明，PPP1R14B在多种成人肿瘤组织中高表达，其高表达患者生存率较低[18]。本研究结果还发现，子宫内膜癌中PPP1R14B表达与年龄、病理分级、FIGO分期、淋巴结转移、组织分化程度有关，年龄>50岁、病理分级G2-G3级、FIGO分期Ⅱ-Ⅲ期、淋巴结转移、组织分化程度中低分化患者PPP1R14B阳性率升高，表明PPP1R14B可能参与子宫内膜癌的发生和发展，与病情恶化相关，可以作为临床检测指标。此外本研究发现，PPP1R14B mRNA高表达患者5年生存率显著低于PPP1R14B mRNA低表达患者，提示PPP1R14B mRNA高表达的子宫内膜癌患者可能生存率较低，预后较差，可能成为子宫内膜癌治疗的潜在靶基因。多因素 Cox 回归分析结果显示，年龄、病理分级、PPP1R14B高表达水平、FIGO分期、淋巴结转移是预后的独立危险因素。提示PPP1R14B高表达对子宫内膜癌患者预后具有一定的评估作用。简肖肖等人研究表明，PPP1R14B表达水平与神经母细胞瘤恶性程度呈正相关，与患者预后呈负相关[19]。也有研究报道，PPP1R14B与慢性淋巴细胞白血病的短生存有关[20],与本研究类似。

综上所述，PPP1R14B在癌组织中高表达，与年龄、病理分级、淋巴结转移、FIGO分期和预后密切相关，是影响预后的危险因素。临床可参考PPP1R14B表达水平评估患者病情，改善患者预后。本研究也存在一定的不足，未对PPP1R14B表达在子宫内膜癌发生和发展中的相关机制进行探讨，后续会从细胞学和分子遗传水平上进行深入研究。

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