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EGFL6在胃癌中的表达及其与预后的关系

2021-01-25 144 上传者：管理员

摘要：目的：探讨表皮生长因子样蛋白（EGFL）6在胃癌中的表达及其与临床病理因素及预后的关系。方法：收集2016年3月至2018年2月间温州医科大学附属第二医院育英儿童医院接受手术切除的原发性胃癌组织及癌旁组织各80例，以免疫组织化学染色法判定组织中EGFL6的表达，对染色结果与相关临床病理因素及预后进行统计学分析。结果：EGFL6的表达与胃癌肿瘤直径、浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期具有相关性（P<0.05）;EGFL6的表达、患者年龄、肿瘤直径、细胞分化、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期均与胃癌患者的预后相关（P<0.05）。结论：EGFL6的表达与胃癌患者临床病理因素存在相关性，提示EGFL6在胃癌的发生发展中起重要作用。

关键词：
病理
肿瘤
胃癌
表皮生长因子样
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截至2016年，全球有近120万胃癌突发病例，发病率增加了15%[1]。化疗及手术治疗仍是当前对多数进展期胃癌的首要治疗方式，尽管取得了进展，但胃癌的长期存活率仍不能令人满意。表皮生长因子样蛋白（epidermalgrowthfactorlike,EGFL）家族含多个重复表皮生长因子表达，并通过与其受体结合触发多种生物学功能，如血管生成、增殖、凋亡、细胞周期调节、迁移和侵袭[2]。EGFL7已被证明在癌症发生发展中起作用[3]。EGFL6作为一种分泌蛋白，其结构同源性位于人Xp22染色体上[4]。EGFL6能通过细胞外信号调节激酶刺激内皮细胞的增殖和迁移，并在基质血管细胞的黏附和增殖中起到作用[5]。EGFL6的表达改变已在多种癌症中被检测到，如卵巢癌[6]、结肠癌[7]等；但EGFL6在胃癌发生发展中的作用知之甚少。本研究的目的旨在探究EGFL6在胃癌患者中的表达和作用，探讨EGFL6表达水平与胃癌临床病理特征及预后之间的关系。

1、对象和方法

1.1对象

收集2016年3月至2018年2月间温州医科大学附属第二医院育英儿童医院接受胃癌根治手术切除的原发性胃癌组织及癌旁组织（距肿瘤边缘>5cm）各80例，其中男50例，女30例，年龄（62±11）岁；所有患者术前均经病理学证实，且均未接受放疗或化疗。所有患者均接受标准的胃癌根治术，术后治疗统一按照美国国立综合癌症网络胃癌临床实践指南执行。

1.2免疫组织化学染色

通过DAB染色法检测EGFL6在胃癌及癌旁组织中的表达。石蜡包埋的胃癌组织切片在二甲苯中脱蜡、水化，用3%过氧化氢溶液封闭内源性过氧化物酶活性10min后，进行抗原热修复。用10%的山羊血清进行抗原封闭，后滴加纯化的单克隆兔抗人EGFL6抗体（稀释度1:100，英国Abcam公司）作为一抗处理胃癌切片。在4℃下pH7.4中孵育16h,37℃下复温30min。滴加酶标山羊抗兔二抗在室温中孵育30min,DAB显色试剂显色，苏木精复染，脱水，封片，显微镜下观察，用已知的阳性切片作为阳性对照，用PBS代替I抗，作为阴性对照。癌旁组织也按照上述方法进行操作。结果判定：在胃癌及癌旁组织切片中EGFL6阳性表达的细胞主要表现为细胞质、细胞膜染为棕黄色。判定标准：采用双盲法计数10个高倍视野，阳性细胞数<10%为阴性，≥10%为阳性，同时忽略较弱或可疑的染色。

1.3随访

由病理学专家组根据第8版TNM分期系统对临床和组织学分类进行分组。对所有术后患者每3至6个月通过信函或电话进行随访，随访时间为3年，最后1次随访时间为2020年9月30日。在前3年内每3至6个月进行胃镜、腹部CT或增强CT扫描评估疾病状态。

1.4统计学处理方法

采用SPSS19.0软件进行统计学分析。计数资料比较用χ2检验，生存曲线用Kaplan-Meier法比较，生存率比较用Log-rank检验，预后影响因素用COX比例风险回归模型进行评估。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1EGFL6在胃癌组织中的表达

EGFL6在胃癌组织中主要表达于腺细胞的细胞质和细胞膜中，阳性表达呈黄棕色颗粒，在邻近癌旁组织中EGFL6呈阴性或弱阳性表达，见图1-2。

图1胃癌组织EGFL6阳性表达（DAB染色，×100)

图2邻近癌旁组织EGFL6阴性表达（DAB染色，×100)

2.2EGFL6在胃癌及癌旁组织中的表达差异

在80例胃癌组织中，阳性表达者有54例（67.5%）；在80例对应癌旁组织中，阳性表达者有11例（13.75%），胃癌组织中EGFL6的表达显著高于邻近癌旁组织，差异有统计学意义（χ2=47.909,P<0.01）。

2.3EGFL6表达与胃癌临床病理因素的关系

EGFL6表达与胃癌患者肿瘤直径、浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期有关（P<0.05），见表1。EGFL6蛋白的表达、年龄、肿瘤直径、细胞分化、浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期均与胃癌患者的预后相关（P<0.05），见表2。

2.4EGFL6与胃癌预后的关系

EGFL6阴性表达患者的3年中位无病生存率（88.5%）较阳性表达患者（64.8%）高，差异有统计学意义（P<0.05），见图3。COX回归模型分析显示，年龄、肿瘤直径、细胞分化程度是影响胃癌术后患者预后的独立因素，见表3。

3、讨论

EGFL6可以在体内外促进肿瘤细胞的迁移和增殖。据已有研究数据显示，EGFL6在内皮细胞增殖和血管生成中起到作用，并促进结直肠癌的侵袭和转移[8]。部分表皮生长因子家族蛋白，如人肝素结合性表皮生长因子（heparin-bindingepidermalgrowthfactor,HB-EGF）已被证明在细胞癌变的过程中发挥重要作用[9]，并且能作为癌症的预后指标[10]。有研究报道EGFL6参与了人类癌症的进展[2]，如卵巢癌[6]、乳腺癌[11]、肺癌[12]等，并且EGFL6已被证明是卵巢癌患者生存率低的预测因子[6]。

表1EGFL6表达与胃癌患者临床病理因素的关系（例）

本研究表明了EGFL6与胃癌的发生、发展有关。EGFL6蛋白的表达、患者的年龄、肿瘤直径、细胞分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期均与胃癌术后患者的预后相关，提示EGFL6的高表达是胃癌患者预后不良的重要分子标志。但EGFL6的表达程度与肿瘤的分化程度及腹膜转移无明显相关性。且COX多因素生存分析提示EGFL6的表达并非胃癌预后的独立因素，究其原因可能与样本容量不足以及胃癌的早期发现与治疗有关，需进一步扩充样本量验证。

表280例胃癌患者临床病理因素与预后的关系（例）

图3EGFL6阳性表达与阴性表达胃癌患者的生存曲线

关于EGFL6在癌症中的作用机制，ZHANG等[13]指出EGFL6可以通过调节WNT/β-catenin信号传导途径，诱导β-catenin及其下游蛋白CyclinD1表达，促进结直肠癌细胞生长，在结直肠癌的进展中起关键作用。PI3K/AKT通路已被确定是参与肿瘤细胞凋亡的重量信号通路之一，其通路的激活能促进肿瘤细胞的生长和进展，ZHU等[14]研究发现AKT的磷酸化受细胞内EGFL6水平的影响，并呈现正相关，在鼻咽癌细胞中沉默EGFL6时AKT信号通路受到抑制从而表现出肿瘤生长的停滞，表明EGFL6可以通过激活AKT通路促进鼻咽癌细胞的迁移。EGFL6的表达可以使上皮间质发生转化，此过程参与了肿瘤的发生，通过增强细胞的迁移、侵袭和抗凋亡能力，使肿瘤细胞恶性程度增高，赋予癌细胞转移特性。但EGFL6在胃癌中的作用机制目前鲜有研究，本研究表明EGFL6与胃癌的部分临床病理因素具有相关性，下一步将采用抗EGFL6的单克隆抗体阻断EGFL6表达以控制胃癌细胞的增殖，深入研究EFGL6在胃癌细胞中的作用机制及相关信号通路调节的影响，为利用EGFL6的生物学特性设计靶向药物治疗胃癌提供有价值的实验基础。

表3胃癌患者预后的多因素COX回归分析结果

本研究显示EGFL6的表达在临床分析中与胃癌患者存在相关性，提示EGFL6在胃癌的发生发展中起重要作用。EGFL6的检测有望成为胃癌分子诊断和病期评估的标志之一，为胃癌的治疗提供一个新的分子靶标。

李利义,涂富洋,尤孙武,沈雷斌,游涛,郑志强.EGFL6在胃癌中的表达及其与预后的关系[J].温州医科大学学报,2021,51(01):45-48.